短发卡RNA敲除热休克蛋白70对结肠癌细胞HT29的影响

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目的 利用RNA干扰技术观察敲除热休克蛋白70 (HSP70)对结肠癌细胞HT29细胞的影响.方法 实验分为4组:空白组、空质粒组,另外2组是使用已经构建的2种干扰HSP70表达的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,并且将其转染到结肠癌细胞HT29中,分为实验1组(shRNA-1)和实验2组(shRNA-2).利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法观察HT-29细胞中HSP70的表达,噻唑蓝(MTT)比色法观察HT29细胞的增殖,流式细胞仪检测其细胞周期以及凋亡的变化.结果 与空白组和空质粒组比较,利用单发夹RNA技术敲除HSP70后,实验2组的HT-29细胞中HSP70的RNA和蛋白表达明显下降(P<0.05);MTT检测结果提示HT29结肠癌细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),细胞周期检测结果提示G1期细胞阻滞,同时明显增加了凋亡细胞的比例(P<0.01).结论 HSP70沉默能抑制结肠癌细胞HT29细胞的增殖,促进凋亡。

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