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目的 体外诱导自体骨髓间充质干细胞(aMSC)向软骨细胞分化,验证三维动态诱导培养的软骨分化效率和远期修复效应.方法 分离培养多样本aMSC,分别行转壁生物反应器内三维动态诱导(三维动态诱导组)培养和常规二维平面诱导(二维平面诱导组)培养,比较各自的软骨分化效率;收获细胞与注射型蛋白胶混合,修复动物关节软骨缺损.8、12、24、48周后分别取材,观察大体形态和组织学形态,进行组织学评分,比较长期修复效果.结果 二维平面诱导时仅出现局部蛋白多糖沉积,只少数细胞表达Ⅱ型胶原;三维动态诱导培养时蛋白多糖沉积明显并广泛表达Ⅱ型胶原,其胶原产量和蛋白多糖含量明显高于二维平面诱导组.在体内实验中,三维动态诱导组:8、12周后缺损完全修复,表面光滑,质地坚硬,与周围软骨紧密结合,组织学表现为类透明软骨结构,24、48周后修复组织与周围界限消失,仍保持类透明软骨的结构.二维平面诱导组:8周后软骨缺损即可被类透明软骨修复,但12周后即开始出现退变,24周后退化明显,软骨组织骨化变薄,48周后则大部分骨性退化,表层残留菲薄纤维组织.结论 三维动态诱导培养可提高aMSC的软骨分化效率和远期修复效果,可为深化自体软骨组织工程研究提出新思路.