成纤维细胞介导的α干扰素基因疗法的建立

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以成纤维细胞为基因载体细胞,建立α干扰素(IFN-α)基因疗法的实验模型,并动态观察实验动物体内IFN-α的分泌水平。将682bp的全序列人IFN-α5 cDNA插入到携有NeoR基因的表达载体BMGNeo的Xhol位点上,对此重组表达载体(BMGNeo-IFN-α)进行了限制性酶切鉴定。用磷酸钙共沉淀法将BMGNeo-IFN-α转入NIH3T3成纤维细胞中,通过G418抗性筛选、有限稀释和检测上清中IFN-α生物活性,从14株阳性克隆中筛选到一株高分泌IFN-α达1024U/ml的克隆株(NIH3T3-IFN-α+)。将此阳性克隆细胞体外大量扩增,包裹入胶原,然后埋植入小鼠腹腔内,于12小时到15天可从小鼠血清中检测出IFN-α,以72小时的分泌水平最高,表明成纤维细胞能成功地将人IFN-α基因导入体内并稳定表达。

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