【摘 要】
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根据GenBank中龚地弓形虫529 bp重复序列设计引物,以弓形虫RH株基因组DNA为模板,常规PCR扩增出长度212 bp的特异性保守序列,将其克隆到pGEM-T Easy载体中构建重组质粒标准品;
【机 构】
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扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,江苏省寄生虫病防治研究所
【基金项目】
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“十一五”国家科技支撑计划重点项目(2010BAD04B02);江苏省高校优势学科建设工程资助项目
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根据GenBank中龚地弓形虫529 bp重复序列设计引物,以弓形虫RH株基因组DNA为模板,常规PCR扩增出长度212 bp的特异性保守序列,将其克隆到pGEM-T Easy载体中构建重组质粒标准品;以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立弓形虫荧光定量PCR检测方法.将该方法用于临床病死猪的弓形虫检测.结果表明:用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,溶解曲线特异相关系数0.997,平均试验间变异系数2.30%,能检
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