探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)SNHG1对帕金森病细胞模型SH-SY5Y细胞自噬及生长的影响并初步分析其作用机制。
方法(1)体外培养SH-SY5Y细胞，采用不同浓度1-甲基-4-苯基-吡啶离子（MPP+）作用不同时间后利用Western blotting检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62的表达；四唑盐（MTT）法检测SH-SY5Y的存活率。(2)用不同浓度MPP+作用SH-SY5Y不同时间后利用实时荧光定量PCR技术检测SNHG1的表达。(3)利用特异性siRNA下调SHSY5Y内源性SNHG1的表达，经MPP+处理后Western Blotting检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62的表达，MTT法检测SH-SY5Y的生存率，同时结合自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1 (Baf A1)以及自噬诱导剂雷帕霉素进一步明确SNHG1的作用途径。(4)用不同浓度MPP+作用SH-SY5Y不同时间后采用采用Western blotting实验检测p27的表达，同时特异性下调SHSY5Y内源性SNHG1的表达，经MPP+处理后Western blotting实验检测p27的表达。
结果(1)MPP+作用于SH-SY5Y后LC3-Ⅱ表达明显升高，呈剂量及时间依赖性；同时自噬底物p62表达下降；提示细胞自噬水平升高。MTT结果显示2.50 mmol/L MPP+干预时可明显降低SH-SY5Y的存活率，与其他浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与阴性对照组比较，MPP+作用SH-SY5Y细胞后SNHG1表达明显升高，呈剂量及时间依赖性。(3)特异性下调SNHG1表达后MPP+诱导的LC3-Ⅱ表达受抑制，同时p62表达升高；而下调SNHG1的同时联合Baf A1处理SH-SY5Y可促进LC3-Ⅱ的表达；提示SNHG1主要影响SH-SY5Y的自噬小体形成阶段。MTT结果显示特异性下调SNHG1表达后SH-SY5Y细胞的存活率明显升高，而联合自噬诱导剂雷帕霉素同时处理SH-SY5Y则可进一步抑制其细胞活性；提示SNHG1通过促进SH-SY5Y细胞自噬形成继而抑制其生长。(4)信号通路研究提示，p27在MPP+处理的SH-SY5Y细胞中表达明显升高，呈剂量及时间依赖性；而特异性下调SNHG1表达可抑制p27的表达；提示SNHG1可能通过p27信号通路介导SH-SY5Y细胞的自噬及生长调控。
结论长链非编码RNA SNHG1可诱导SH-SY5Y细胞自噬的发生，促进细胞的死亡，其机制可能与p27的表达调控有关。