【摘 要】
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基于同源克隆技术,本试验从野生潘那利番茄(Solanum pennellii)中获得一个钙依赖蛋白激酶家族基因CDPK4的全长序列;构建原核表达载体,并利用Western blot对重组蛋白进行验证;
【机 构】
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新疆农业科学院园艺作物研究所,乌鲁木齐830091;新疆农业大学林学与园艺学院,乌鲁木齐830052;新疆农业科学院园艺作物研究所,乌鲁木齐830091;新疆农业大学林学与园艺学院,乌鲁木齐83005
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基于同源克隆技术,本试验从野生潘那利番茄(Solanum pennellii)中获得一个钙依赖蛋白激酶家族基因CDPK4的全长序列;构建原核表达载体,并利用Western blot对重组蛋白进行验证;同时分析了该激酶的亚细胞定位情况及其在幼苗期不同组织的表达情况.结果 表明,野生潘那利番茄SpCDPK4的开放阅读框长度为1746 bp,编码581个氨基酸,理论蛋白分子量约为64.58 kDa,等电点为5.54,是非分泌型、亲水的稳定蛋白,且定位于细胞膜上.多序列比对及系统发育树分析表明,SpCDPK4编码的氨基酸序列与栽培番茄S1CDPK4 (XP_010327694.1)和马铃薯StCDPK4 (NM_001287877)相似度最高,相似性均为65.1％,与拟南.芥AtCDPK20亲缘关系最近,归为第二类.SDS-PAGE电泳检测结果发现在70 kDa左右处有一条特异表达的蛋白条带,与预期目的 产物大小一致,且Western-blot结果显示其能与anti-His单克隆抗体发生特异性反应.RT-qPCR结果表明,SpCDPK4在潘那利番茄不同组织中均有表达,且根中的表达量显著高于叶和茎;此外在盐胁迫下,SpCDPK4在根中的表达量迅速积累,且在1h时达到峰值.
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