探讨腺苷A2A受体激动剂(CGS21680)联合骨髓间充质干细胞(BMMSC)移植治疗急性肝功能衰竭(ALF)的疗效及可能机制。
方法50只6～8周雄性C57BL/6小鼠普通饲养1周后，采用随机数字法将小鼠分为健康对照组6只，模型对照组11只，BMMSC组11只，CGS21680/BMMSC组11只，CGS21680组11只。除健康对照组外，其余小鼠腹腔注射D-GalN和脂多糖建立ALF模型。10 h后，CGS21680/BMMSC组、CGS21680组腹腔注射腺苷A2A受体激动剂CGS21680(2.1 mg/kg)。另外，BMMSC组、CGS21680/BMMSC组尾静脉注射BMMSC 1×106/只。24 h后，苏木精-伊红染色观察肝脏组织病理变化，流式细胞仪检测各组小鼠脾脏Treg占CD4＋T淋巴细胞比例变化，ELISA试剂盒检测血清炎性因子IL-6、TNF-ɑ含量，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测肝组织TLR4、核因子-κB表达水平。应用单因素方差分析(one-way ANOVA)和SNK-q检验。
结果健康对照组血清IL-6为(23.67±2.97) pg/mL，模型对照组为(151.47±6.03) pg/mL，BMMSC组为(72.10±3.74) pg/mL，CGS21680/BMMSC组为(53.35±2.50) pg/mL，CGS21680组为(84.85±3.25) pg/mL，健康对照组与其他4组比较差异均有统计学意义(t值分别为46.02、25.51、19.58和34.03，均P<0.01)。健康对照组血清TNF-ɑ水平为(24.62±3.19) pg/mL，模型对照组为(102.25±2.10) pg/mL、BMMSC组为(54.71±2.23) pg/mL，CGS21680/BMMSC组为(42.20±4.72) pg/mL，CGS21680组为(81.76±3.50) pg/mL，健康对照组与其他4组比较差异均有统计学意义(t值分别为46.49、19.97、7.72和29.57，均P<0.01)。健康对照组脾脏Treg比例与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义(t值分别为51.67、12.22、5.91和18.21，均P<0.01)。健康对照组肝组织TLR4 mRNA水平与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义(t值分别为26.31、21.33、13.24和27.14，均P<0.01)；健康对照组肝组织核因子-κB mRNA水平与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义(t值分别为16.56、16.34、7.83和13.11，均P<0.01)。健康对照组肝组织TLR4蛋白水平与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义(t值分别为35.60、10.38、6.05和18.02，均P<0.05)；健康对照组肝组织NF-κB蛋白水平与模型对照组、BMMSC组、CGS21680/BMMSC组和CGS21680组比较差异均有统计学意义(t值分别为10.80、7.30、4.61和13.24，均P<0.05)。
结论腺苷A2A受体激动剂联合BMMSC移植可显著上调ALF小鼠体内Treg比例，抑制TLR4/核因子-κB通路的激活，两者协同调节作用，进而进一步抑制肝脏炎性反应。