【摘 要】
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按照SMART cDNA文库构建试剂盒说明,以TRIZOL试剂提取的土耳其斯坦东毕吸虫成虫总RNA为模板,以含Sfi Ⅰ B酶切位点的oligo(dT)为引物反转录合成第一链cDNA,利用含Sfi Ⅰ A酶
【机 构】
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中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所,黑龙江兽医科学研究所
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按照SMART cDNA文库构建试剂盒说明,以TRIZOL试剂提取的土耳其斯坦东毕吸虫成虫总RNA为模板,以含Sfi Ⅰ B酶切位点的oligo(dT)为引物反转录合成第一链cDNA,利用含Sfi Ⅰ A酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA 5'端延伸出去的模板,采用LD-PCR技术以改良的oligo(dT)引物合成双链cDNA,经蛋白酶K和Sfi Ⅰ消化后,过CHROMA SPIN-400柱进行分级分离.双链cDNA与载体λTripEx2两臂连接,体外包装后构建成土耳其斯坦东毕
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