论文部分内容阅读
【摘要】目的：建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定复方威麦灵胶囊中岩白菜素含量的方法。方法：采用ODS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈-水（15∶85）为流动相，流速为10mL/min；柱温：30℃；检测波长：275nm。结果：岩白菜素浓度在209～2094μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=09998，平均回收率为9880%（RSD为065%）。结论：本方法操作简单，结果准确可靠，可用于复方威麦灵胶囊中岩白菜素的含量测定。
【关键词】复方威麦灵胶囊；岩白菜素；反相高效液相色谱法
【中图分类号】R914【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）04-0027-03
Determination of Bergenin in Compound Wei Mailing Capsules by RP-HPLCZHU ZhenghuaBAO HuayanLUO Min
Yunnan qujing city food and drug inspection test center，Qujing 655000，ChinaAbstract：Objective To establish high performance liquid chromatography（HPLC） determination of bergenin in compound Wei Mailing capsulesMethod The determination was performed on ODS HYPERSIL C18（250mm×46mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（15∶85，V/V）at the flow rate of 10 ml/min The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was set at 275nmResults The linear range of bergenin were 209～2094 μg（r=09998）with an average recovery of 9880%（RSD=065%）.Conclusions The method is simple， the result is accurate and reliableIt can be used for the determination of bergenin in compound Wei Mailing capsules
Keywords：Compound Wei Mailing Capsules； Bergenin；RP-HPLC
復方威麦灵胶囊是曲靖市第一人民医院研制的院内制剂。由金荞麦、岩白菜素、绞股蓝组成，具有祛邪扶正、清热解毒、活血化瘀、消瘀散结、镇咳祛痰的功效，临床用于咳嗽、慢性支气管炎、肺脓疡，肺癌等症，配合放化疗有增效减毒作用。制剂中岩白菜素具有镇咳祛痰功效，临床用于慢性支气管炎。复方威麦灵胶囊现行质量标准中以化学鉴别及浸出物来控制药品质量，未建立制剂中岩白菜素的含量测定方法。本研究参照文献[3-5]，以岩白菜素为定量控制指标，采用反向高效液相色谱法对岩白菜素进行含量测定，为有效控制复方威麦灵胶囊质量提供了准确可靠且简便易行的方法。
1仪器与材料
11仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪（包括G1311C系列四元泵，G1314F VMD检测器，G1316A柱温箱，G1329B自动进样器）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；一体式超纯水仪（PURELAB FLex 3，英国ELGA公司）
12材料岩白菜素（批号：111532-201203，含量以1000%，中国食品药品检定研究院）；甲醇为分析纯，乙腈为色谱纯，水为二次纯化水。复方威麦灵胶囊（批号：150909、151216、160421，曲靖市第一人民医院制剂室）。
2方法与结果
21色谱条件ODS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈（A）-水（B）（15∶85）为流动相；流速为10mL/min；柱温：30℃；检测波长：275nm；进样量10μL。
22 溶液制备
221供试品溶液制备取本品内容物，混匀，取约05g，精密称定，置100mL量瓶中，加入甲醇适量，超声（频率：45KHz；功率：300W）40min，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
222对照品储备液的制备精密称取岩白菜素对照品1047mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得岩白菜素2094μg/mL的对照品储备溶液。
223阴性样品溶液的制备按复方威麦灵胶囊处方比例，分别称取除岩白菜素以外的其他药材，依复方威麦灵胶囊工艺制备不含岩白菜素的阴性样品，并按“221”项下制备阴性样品溶液。
23线性关系的考察分别精密吸取“222”项下岩白菜素对照品储备溶液10、25、50、75、10mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得含岩白菜素分别为2090、5235、10470、15705、20940 μg/mL 的系列对照品溶液。在“21”项下色谱条件进样分析，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得岩白菜素的回归方程Y=97331X+480052（r=09998）。结果表明：岩白菜素浓度在209～2094μg范围内具有良好线性关系。 24精密度试验精密吸取同一岩白菜素对照品溶液（含岩白菜素15705 μg/mL）“21”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，峰面积值的RSD为032%。
25重复性试验取同1批复方威麦灵胶囊（批号150909）6份，按“221”項下的方法处理，考察方法的重复性。供试品中岩白菜素含量的RSD为12%。
26稳定性试验取同1份供试品溶液（批号150909），分别于0、2、4、8、12、24h按“21”项下色谱条件进行分析。结果岩白菜素峰面积值的RSD为12%。表明供试品溶液在室温下放置24h基本稳定。
27回收率试验分别取已知含量的同一批复方威麦灵胶囊（批号150909）约025g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液（浓度为7011 mg/mL）1mL，按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，分别测定，计算回收率。平均回收率为9880%，RSD为065%。见表1。
28专属性试验将阴性样品溶液按“21”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。结果色谱图中在岩白菜素相应出峰位置未出现干扰峰。
表1回收率测定结果（n=6）
序号取样量/g样品中岩白
菜素量/mg加入岩白
菜素量/mg测得岩白菜
素总量/mg回收率/%平均回
收率/%RSD/%10250972188701114218199832025037201570111408089812302507721370111413339871402505720727011141673992750250372015701114095498336025087215970111412279851988065
29样品含量测定取不同批号的供试品3批按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，按“21”项下色谱条件进样测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算岩白菜素含量。见表2。
表2样品含量测定结果（n=3）批号岩白菜素含量/mg/g123平均值RSD/
%150909287612853228529285070931503092689326912702527664108160103273212756227726285360713讨论
31流动相的选择实验先后试用文献中[3-4]甲醇-水（25∶75）不同比例作为流动相以及文献中[5]中甲醇-1%醋酸溶液（11∶89）不同比例作为流动相测定，对照品及样品中岩白菜素的峰形均不理想。结果本文试用了文献[6]的乙腈-水（10∶90）的不同比例作为流动相，结果以乙腈-水（15∶85）为流动相能得到对称性较好的岩白菜素峰，并且样品中岩白菜素与其它杂质能很好地分离，故选用乙腈-水（15∶85）为流动相。
32提取方法的选择①提取方法的确定：试验中试用了文献[6]中样品处理方法，结果超声提取效果较好，且加标回收率较高，故选用超声提取。②超声时间的确定：精密称取样品（批号20150909）5份，每份约05g，置100mL量瓶中，加入甲醇适量，分别超声（频率：45KHz；功率：300W）处理10、20、30、40、50 min后测定岩白菜素含量，结果超声30 min后，岩白菜素含量基本不再改变，证明样品超声处理30min后，能将样品中的岩白菜素提取完全，所以超声（频率：45KHz；功率：300W）时间确定为40 min。
综上，该方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于复方岩白菜胶囊中岩白菜素的含量测定。参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：105.
[2] 王刚.麻兵继. 岩白菜素的研究概况[J].安徽中医学院学报，2002，21（6）：59.
[3]孙诗清.李多伟.郭培莹. RP-HPLC测定不同产地鬼灯檠中岩白菜素的含量[J].中成药，2003，25（12）：979-981.
[4] 杨怀镜，姚宏春，张全望. HPLC 法测定岩白菜素和复方岩白菜素片的含量[J].中国药事，2003，17（3） ： 171.
[5] 魏学君，任文学，陈占立，等. 反相高效液相色谱法测定复方矮地茶胶囊中岩白菜素含量[J]. 中国药业. 2009，18（22）：29-30.
[6] 彭朝霞，杨朝莲，熊然英，等. 高效液相色谱法测定两种岩陀中岩白菜素的含量[J]. 中国生化药物杂志. 2012，33（4）：319-321.
（收稿日期：2016-12-09编辑：梁志庆）
【关键词】复方威麦灵胶囊；岩白菜素；反相高效液相色谱法
【中图分类号】R914【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）04-0027-03
Determination of Bergenin in Compound Wei Mailing Capsules by RP-HPLCZHU ZhenghuaBAO HuayanLUO Min
Yunnan qujing city food and drug inspection test center，Qujing 655000，ChinaAbstract：Objective To establish high performance liquid chromatography（HPLC） determination of bergenin in compound Wei Mailing capsulesMethod The determination was performed on ODS HYPERSIL C18（250mm×46mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（15∶85，V/V）at the flow rate of 10 ml/min The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was set at 275nmResults The linear range of bergenin were 209～2094 μg（r=09998）with an average recovery of 9880%（RSD=065%）.Conclusions The method is simple， the result is accurate and reliableIt can be used for the determination of bergenin in compound Wei Mailing capsules
Keywords：Compound Wei Mailing Capsules； Bergenin；RP-HPLC
復方威麦灵胶囊是曲靖市第一人民医院研制的院内制剂。由金荞麦、岩白菜素、绞股蓝组成，具有祛邪扶正、清热解毒、活血化瘀、消瘀散结、镇咳祛痰的功效，临床用于咳嗽、慢性支气管炎、肺脓疡，肺癌等症，配合放化疗有增效减毒作用。制剂中岩白菜素具有镇咳祛痰功效，临床用于慢性支气管炎。复方威麦灵胶囊现行质量标准中以化学鉴别及浸出物来控制药品质量，未建立制剂中岩白菜素的含量测定方法。本研究参照文献[3-5]，以岩白菜素为定量控制指标，采用反向高效液相色谱法对岩白菜素进行含量测定，为有效控制复方威麦灵胶囊质量提供了准确可靠且简便易行的方法。
1仪器与材料
11仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪（包括G1311C系列四元泵，G1314F VMD检测器，G1316A柱温箱，G1329B自动进样器）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；一体式超纯水仪（PURELAB FLex 3，英国ELGA公司）
12材料岩白菜素（批号：111532-201203，含量以1000%，中国食品药品检定研究院）；甲醇为分析纯，乙腈为色谱纯，水为二次纯化水。复方威麦灵胶囊（批号：150909、151216、160421，曲靖市第一人民医院制剂室）。
2方法与结果
21色谱条件ODS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈（A）-水（B）（15∶85）为流动相；流速为10mL/min；柱温：30℃；检测波长：275nm；进样量10μL。
22 溶液制备
221供试品溶液制备取本品内容物，混匀，取约05g，精密称定，置100mL量瓶中，加入甲醇适量，超声（频率：45KHz；功率：300W）40min，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
222对照品储备液的制备精密称取岩白菜素对照品1047mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得岩白菜素2094μg/mL的对照品储备溶液。
223阴性样品溶液的制备按复方威麦灵胶囊处方比例，分别称取除岩白菜素以外的其他药材，依复方威麦灵胶囊工艺制备不含岩白菜素的阴性样品，并按“221”项下制备阴性样品溶液。
23线性关系的考察分别精密吸取“222”项下岩白菜素对照品储备溶液10、25、50、75、10mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得含岩白菜素分别为2090、5235、10470、15705、20940 μg/mL 的系列对照品溶液。在“21”项下色谱条件进样分析，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得岩白菜素的回归方程Y=97331X+480052（r=09998）。结果表明：岩白菜素浓度在209～2094μg范围内具有良好线性关系。 24精密度试验精密吸取同一岩白菜素对照品溶液（含岩白菜素15705 μg/mL）“21”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，峰面积值的RSD为032%。
25重复性试验取同1批复方威麦灵胶囊（批号150909）6份，按“221”項下的方法处理，考察方法的重复性。供试品中岩白菜素含量的RSD为12%。
26稳定性试验取同1份供试品溶液（批号150909），分别于0、2、4、8、12、24h按“21”项下色谱条件进行分析。结果岩白菜素峰面积值的RSD为12%。表明供试品溶液在室温下放置24h基本稳定。
27回收率试验分别取已知含量的同一批复方威麦灵胶囊（批号150909）约025g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液（浓度为7011 mg/mL）1mL，按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，分别测定，计算回收率。平均回收率为9880%，RSD为065%。见表1。
28专属性试验将阴性样品溶液按“21”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。结果色谱图中在岩白菜素相应出峰位置未出现干扰峰。
表1回收率测定结果（n=6）
序号取样量/g样品中岩白
菜素量/mg加入岩白
菜素量/mg测得岩白菜
素总量/mg回收率/%平均回
收率/%RSD/%10250972188701114218199832025037201570111408089812302507721370111413339871402505720727011141673992750250372015701114095498336025087215970111412279851988065
29样品含量测定取不同批号的供试品3批按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，按“21”项下色谱条件进样测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算岩白菜素含量。见表2。
表2样品含量测定结果（n=3）批号岩白菜素含量/mg/g123平均值RSD/
%150909287612853228529285070931503092689326912702527664108160103273212756227726285360713讨论
31流动相的选择实验先后试用文献中[3-4]甲醇-水（25∶75）不同比例作为流动相以及文献中[5]中甲醇-1%醋酸溶液（11∶89）不同比例作为流动相测定，对照品及样品中岩白菜素的峰形均不理想。结果本文试用了文献[6]的乙腈-水（10∶90）的不同比例作为流动相，结果以乙腈-水（15∶85）为流动相能得到对称性较好的岩白菜素峰，并且样品中岩白菜素与其它杂质能很好地分离，故选用乙腈-水（15∶85）为流动相。
32提取方法的选择①提取方法的确定：试验中试用了文献[6]中样品处理方法，结果超声提取效果较好，且加标回收率较高，故选用超声提取。②超声时间的确定：精密称取样品（批号20150909）5份，每份约05g，置100mL量瓶中，加入甲醇适量，分别超声（频率：45KHz；功率：300W）处理10、20、30、40、50 min后测定岩白菜素含量，结果超声30 min后，岩白菜素含量基本不再改变，证明样品超声处理30min后，能将样品中的岩白菜素提取完全，所以超声（频率：45KHz；功率：300W）时间确定为40 min。
综上，该方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于复方岩白菜胶囊中岩白菜素的含量测定。参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：105.
[2] 王刚.麻兵继. 岩白菜素的研究概况[J].安徽中医学院学报，2002，21（6）：59.
[3]孙诗清.李多伟.郭培莹. RP-HPLC测定不同产地鬼灯檠中岩白菜素的含量[J].中成药，2003，25（12）：979-981.
[4] 杨怀镜，姚宏春，张全望. HPLC 法测定岩白菜素和复方岩白菜素片的含量[J].中国药事，2003，17（3） ： 171.
[5] 魏学君，任文学，陈占立，等. 反相高效液相色谱法测定复方矮地茶胶囊中岩白菜素含量[J]. 中国药业. 2009，18（22）：29-30.
[6] 彭朝霞，杨朝莲，熊然英，等. 高效液相色谱法测定两种岩陀中岩白菜素的含量[J]. 中国生化药物杂志. 2012，33（4）：319-321.
（收稿日期：2016-12-09编辑：梁志庆）