背景:精原干细胞技术的快速发展为生殖工程带来了新希望,而在体外维持染色体数目及结构的稳定性是其使用的关键问题之一。目的:探索精原干细胞染色体G带显示技术及其影响因素,为如何鉴定培养状态下干细胞的染色体核型提供实验参考。设计:观察实验。单位:泸州医学院材料:实验于2004-03/2005-04在泸州医学院医学分子生物学实验室完成。生后10d左右的昆明系小白鼠(雌雄均可)由泸州医学院动物科提供(许可证号:川实动管质第17号),低糖DMEM,10mg/L丝裂霉素C,IMDM培养基,1×10-5mol/L秋水仙素(磷酸缓冲液配置),7.5mmol/L低渗氯化钾,甲醇:冰醋酸(3∶1)固定液,Giemsa染液,0.25%胰蛋白酶。方法:取小白鼠股骨骨髓,进行饲养层细胞的制备。取生后7～8d左右雄性小白鼠睾丸并制成细胞悬液,调整细胞密度为3×105L-1,接种到预先制备好的骨髓基质细胞饲养层上,细胞在37℃、体积分数0.05的CO2、70%湿度的二氧化碳培养箱中培养。待细胞生长到15～20d时,吸出克隆细胞团,吹打分散后滴加秋水仙素处理4～6h。收集细胞悬液,再经低渗处理后滴片染色。选择染色体分散良好,无重叠的分散中期的细胞进行记数,观察染色体形态。主要观察指标:骨髓基质及精原干细胞的培养及染色体显色与计数。结果:精原干细胞的核型与正常小鼠体细胞的染色体形态一致,染色体呈粒状、棒状,核型为20对,40条。在油镜下镜检可见3种染色体形态,一种呈高浓缩状态的染色体,可计数染色体总数,但不能显出带纹;第2种是已完全展开并铺于赤道板上的处于分裂中期的染色体,染色体总数和带纹显示都非常清楚;第3种是染色体已折转并向两极移动,并逐渐开始浓缩,染色体总数可以计数,带纹不能清楚显示。结论:小鼠精原干细胞染色体受到细胞所处的分裂时期、低渗处理的效果、滴片时细胞的分散程度及胰酶浓度及消化时间等因素的影响。