【摘 要】
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目的:探讨肝癌SMMC7721细胞株P27RF-Rho mRNA基因沉默对5-氟脲嘧啶(5-Fu)药物敏感性的影响,为临床晚期肝癌治疗提供理论依据。方法:构建P27RF-Rho RNAi载体,P27RF-Rho基因沉
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目的:探讨肝癌SMMC7721细胞株P27RF-Rho mRNA基因沉默对5-氟脲嘧啶(5-Fu)药物敏感性的影响,为临床晚期肝癌治疗提供理论依据。方法:构建P27RF-Rho RNAi载体,P27RF-Rho基因沉默慢病毒感染SMMC7721肝癌细胞,Western blotting法检测基因沉默效果。SMMC7721细胞分为Scramble-siRNA阴性对照组、5-Fu组、P27RF-Rho-siRNA组和P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组。荧光显微镜检测细胞转染效果,Western blottting法检测RNAi基因沉默效率,MTT法检测各组细胞生长曲线,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中肿瘤相关蛋白P27及RhoC表达。结果:成功构建P27RF-Rho RNAi慢病毒载体。Western blotting法,P27RF-Rho-siRNA组细胞中P27RF-Rho蛋白表达水平明显低于5-Fu组和Scramble-siRNA组(P<0.05)。与其他3组比较,P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组细胞生长速度降低(P<0.05);划痕实验中P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组细胞迁移能力明显减低(P<0.01);P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组穿过Transwell小室微孔滤膜的平均细胞数明显少于其他3组(P<0.01);Western blotting法检测,P27RF-Rho-siRNA+5-Fu组细胞中癌相关蛋白P27表达水平明显高于其他3组(P<0.05),侵袭相关蛋白RhoC表达水平低于其他3组(P<0.05)。结论:P27RF-Rho基因沉默能明显增强5-Fu对肝癌SMMC7721细胞的药物敏感性。
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