【摘 要】
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本研究运用半定量RT-PCR法检测运动发酵单胞菌重组菌中外源基因xylB的转录水平。提取野生型运动发酵单胞菌CP4及其2个重组菌的总RNA,检测无DNA污染后定量至同一浓度、并反转
【机 构】
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天津大学石油化工技术开发中心; 天津大学绿色合成与转化教育部重点实验室; 天津大学内燃机燃烧学国家重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目资助(No30600369)
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本研究运用半定量RT-PCR法检测运动发酵单胞菌重组菌中外源基因xylB的转录水平。提取野生型运动发酵单胞菌CP4及其2个重组菌的总RNA,检测无DNA污染后定量至同一浓度、并反转录为cDNA。观测目的基因xylB和内标基因16SrRNA的PCR扩增曲线、并确定合适的循环数,选用相同量的cDNA为模板,PCR检测各样本中xylB相对16SrRNA的转录水平。结果表明野生型菌株CP4中xylB基因没有转录,而两株重组菌中皆有xylB的转录本,且转录丰度基本一致,酶活测定也进一步证实该基因在重组菌中有效表达。该方法可用于鉴定运动发酵单胞菌中特定基因的转录水平,是一种快速有效的检测方法。
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