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目的
构建人血小板CD36基因220C>T和429＋4insg变异的真核表达载体，并转染HEK293T细胞进行CD36蛋白的表达分析。
方法提取人血小板总RNA并逆转录为cDNA，经PCR扩增获得分别携带220C>T和429＋4insg基因变异的CD36基因片段；经TA克隆将目的基因片段连接到pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体并转化TOP10E.coli，蓝白斑筛选获得阳性质粒，提取质粒DNA进行测序分析；将分别含有220C>T和429＋4insg基因变异体的质粒DNA在effectene作用下转染HEK293T细胞；应用流式细胞术及Western印迹分别对220C>T和429＋4insg基因变异体的CD36蛋白表达进行鉴定分析。
结果通过TA克隆成功构建了pcDNA3.1/V5-His-CD36 (220C>T/429＋4insg)真核表达载体，转染HEK293T细胞后，经流式细胞术和Western印迹分析，证实220C>T和429＋4insg基因变异可导致CD36蛋白在HEK293T细胞的缺失表达。
结论CD36基因220C>T和429＋4insg变异均可引起人血小板CD36的缺失表达，明确了220C>T和429＋4insg变异对CD36表达的影响，为其他CD36基因变异的研究奠定了基础。