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摘要：以金边虎尾兰（Sansevieria trifasciata var. laurenttii）肉质叶片作为外植体材料，进行组织培养研究。结果发现，金边虎尾兰叶龄与叶片部位对愈伤组织的诱导有影响，其中采用一年生叶片中部的组织诱导率最高；诱导叶片愈伤组织最适培养基为MS 2.0 mg/L 2，4-D 0.5 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.7%琼脂 4%蔗糖；诱导芽分化最适培养基为MS 2.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.7%琼脂 4%蔗糖；诱导试管苗生根最适培养基为1/2MS 1.0 mg/L NAA 0.7%琼脂 4%蔗糖。
关键词：金边虎尾兰；愈伤组织；芽分化，诱导生根
中图分类号： S682.360.4 3文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2017）14-0034-02
金边虎尾兰（Sansevieria trifasciata var. laurenttii），别称金边虎皮兰，属龙舌兰科、虎尾兰属植物，原产非洲热带和印度。金边虎尾兰是一种可净化室内空气的观叶草本植物，能清除甲醛、三氯乙烯、硫化氢、苯、苯酚、氟化氢、重金属微粒，还能吸收铀等放射性元素等[1-3]，因此在当今花卉市场中占据着重要的一席，深受人们的喜爱。
传统的虎尾兰繁殖方式为分株繁殖，其繁殖速度不快[4-5]。目前，对虎尾兰愈伤组织的诱导有少量报道[6-7]，但对虎尾兰“器官发生型”诱导方式获得试管苗的系统研究报道较少。本试验以金边虎尾兰叶片为外植体，比较研究叶龄、叶片部位、激素组合对愈伤组织诱导率的影响，并进一步对愈伤组织芽分化以及根诱导成苗的培养基进行优化。
1材料与方法
1.1材料
本试验外植体材料取自金边虎尾兰叶片，金边虎尾兰购自花店，为多年生盆栽苗。
1.2外植体表面的消毒
用小刀从金边虎尾兰植株上取下叶片，在自来水下擦洗掉叶片表面的污垢，将叶片切成2.5 cm×2.5 cm大小的片段，放置到装有洗衣粉溶液的广口瓶中，盖好广口瓶塞，反复振荡浸泡12 min后，倒掉洗衣粉水，用流动自来水冲洗 15 min 洗去洗衣粉残留。冲洗完后把水沥干并盖上盖子，移至超净工作台中，用适量70%乙醇消毒30 s，之后无菌水冲洗2次，加入适量0.1%浓度的HgCl2和1滴吐温，不停摇动，10 min 后，用无菌水冲洗3～4遍，接种时外植体切成 2.0 cm×2.0 cm大小的片段。
1.3外植体的选取
本试验采用了一年生、二年生、多年生叶片作为外植体进行对比实验，另外对当年生叶片进行不同部位（叶基部、中部和顶部）对比试验。
1.4培养基的配制
本试验所用基本培养基均为MS培养基，附加0.7%琼脂、4%蔗糖。愈伤组织诱导培养基共5组，其中培养基1～4分别附加0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 2，4-D，附加浓度均为 0.5 mg/L 的6-BA、NAA的组合；培养基5为附加2.5 mg/L 2，4-D、1.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA的组合。愈伤组织芽分化培养基共6组，其中a～d分别附加0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 6-BA与0.5 mg/L NAA组合，e、f分别附加0.5、2.0 mg/L 6-BA與0.5 mg/L NAA组合。试管苗生根培养基以1/2MS为基本培养基，附加0、0.5、1.0、1.5、2.5 mg/L NAA，共6组（Ⅰ～Ⅴ）。以上试验每处理均接种10瓶，每瓶接种1个外植体。于光照培养箱中培养，培养条件为：温度（25±1） ℃，光照度为2 000 Lx，光照时间为12 h/d。
2结果与分析
2.1不同外植体对愈伤组织诱导的影响
将多年生、二年生和一年生叶片中部所取的片段作为外植体，各接种10瓶在诱导培养基中，于培养箱中培养40 d（表1）。另将当年生叶片的叶鞘部、中部和顶部所取的片段作为外植体，各接种10瓶在诱导培养基中，放在恒温培养箱中培养40 d（表2）研究发现，一年生叶片中部外植体所产生愈伤组织的能力要大于二年生和多年生叶片；嫩叶中部产生愈伤组织的效果最好，愈伤组织诱导倍数达到1.88。综合考虑，选择一年生叶片的中部作为愈伤组织诱导的外植体，可达到较好的诱导效果（图1-a、图1-b）。
2.22，4-D 对愈伤组织诱导的影响
2，4-D 对愈伤组织诱导有着重要影响，适当浓度的 2，4-D有利于愈伤组织的诱导，其中2.0 mg/L 2，4-D与0.5 mg/L 6-BA、NAA时的组合诱导效果最好，且诱导出来的愈伤组织颜色淡黄、结构疏松（图1-b、表3）。
2.4试管苗生根培养基的筛选
由以上试验愈伤组织诱导出来的芽生长至3～4 cm长后，接种到Ⅰ～Ⅴ 5种生根培养基进行根诱导培养30 d后发现，没有添加NAA的Ⅰ号生长出的根数少，而且根的长度也相对较短，生根率也低，Ⅲ～Ⅴ号的生根率都是100%，根的长度上也相差不大，但Ⅲ号的根数明显比其他3种要多，另外Ⅲ号和Ⅳ号所长出的根均比较饱满粗壮。总体来看，Ⅲ号生根培养基对试管苗根诱导效果最好（图1-e、图1-f、表5）。
3讨论
本研究表明，在植物组织培养中不同器官及部位作为外植体，其芽或愈伤组织的诱导率差异较大，因此必须依据材料的特点，选取较易表达全能性的器官及部位，这样不但能降低植物组织培养的难度，而且能达到最佳效果。例如在金边虎尾兰组织培养中，最好的外植体是金边虎尾兰嫩叶片的中部叶片，培养过程中的基部叶片细胞生长缓慢，叶顶部细胞容易死[CM（25]亡。本试验揭示了2，4-D、6-BA、NAA等激素在诱导叶片愈伤组织形成的影响，其中2，4-D 对愈伤组织诱导有着关键性作用，以2.0 mg/L 2，4-D再附加0.5 mg/L 6-BA、05 mg/L NAA的激素组合诱导效果最好；1.0 mg/L NAA促进试管苗生根的效果最好。
参考文献：
[1]林丽仙，谢志南，苏明华，等. 虎尾兰吸收甲醛及其保护酶活性的初步研究[J]. 福建农业学报，2009，24（3）：258-261.
[2]李泽鸿，张 璐，刘文涛，等. 虎皮兰中4种重金属元素的含量测定[J]. 北方园艺，2010（1）：153-154.
[3]林越平，王凤兰，黄子锋. 金边虎尾兰的栽培管理技术[J]. 农业与技术，2008，28（3）：89-90.[HJ1.8mm]
[4]周宇，闫国华，张开春，等. 虎尾兰叶片切段扦插育苗技术[J]. 中国花卉园艺（技术版），2006（4）：25.
[5]刘建雄，李淘涛. 虎尾兰外植体的组织培养[J]. 植物生理学通讯，1987，54（4）：54.
[6]黄凤兰，李静，张茜，等. 虎尾兰的组织培养技术研究[J]. 东北农业大学学报，2012，43（1）：131-136.
[7]谢怡青，温清英. 金边虎尾兰的组织培养和快速繁殖[J]. 农业科技通讯，2007 （6）：56.
关键词：金边虎尾兰；愈伤组织；芽分化，诱导生根
中图分类号： S682.360.4 3文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2017）14-0034-02
金边虎尾兰（Sansevieria trifasciata var. laurenttii），别称金边虎皮兰，属龙舌兰科、虎尾兰属植物，原产非洲热带和印度。金边虎尾兰是一种可净化室内空气的观叶草本植物，能清除甲醛、三氯乙烯、硫化氢、苯、苯酚、氟化氢、重金属微粒，还能吸收铀等放射性元素等[1-3]，因此在当今花卉市场中占据着重要的一席，深受人们的喜爱。
传统的虎尾兰繁殖方式为分株繁殖，其繁殖速度不快[4-5]。目前，对虎尾兰愈伤组织的诱导有少量报道[6-7]，但对虎尾兰“器官发生型”诱导方式获得试管苗的系统研究报道较少。本试验以金边虎尾兰叶片为外植体，比较研究叶龄、叶片部位、激素组合对愈伤组织诱导率的影响，并进一步对愈伤组织芽分化以及根诱导成苗的培养基进行优化。
1材料与方法
1.1材料
本试验外植体材料取自金边虎尾兰叶片，金边虎尾兰购自花店，为多年生盆栽苗。
1.2外植体表面的消毒
用小刀从金边虎尾兰植株上取下叶片，在自来水下擦洗掉叶片表面的污垢，将叶片切成2.5 cm×2.5 cm大小的片段，放置到装有洗衣粉溶液的广口瓶中，盖好广口瓶塞，反复振荡浸泡12 min后，倒掉洗衣粉水，用流动自来水冲洗 15 min 洗去洗衣粉残留。冲洗完后把水沥干并盖上盖子，移至超净工作台中，用适量70%乙醇消毒30 s，之后无菌水冲洗2次，加入适量0.1%浓度的HgCl2和1滴吐温，不停摇动，10 min 后，用无菌水冲洗3～4遍，接种时外植体切成 2.0 cm×2.0 cm大小的片段。
1.3外植体的选取
本试验采用了一年生、二年生、多年生叶片作为外植体进行对比实验，另外对当年生叶片进行不同部位（叶基部、中部和顶部）对比试验。
1.4培养基的配制
本试验所用基本培养基均为MS培养基，附加0.7%琼脂、4%蔗糖。愈伤组织诱导培养基共5组，其中培养基1～4分别附加0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 2，4-D，附加浓度均为 0.5 mg/L 的6-BA、NAA的组合；培养基5为附加2.5 mg/L 2，4-D、1.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA的组合。愈伤组织芽分化培养基共6组，其中a～d分别附加0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 6-BA与0.5 mg/L NAA组合，e、f分别附加0.5、2.0 mg/L 6-BA與0.5 mg/L NAA组合。试管苗生根培养基以1/2MS为基本培养基，附加0、0.5、1.0、1.5、2.5 mg/L NAA，共6组（Ⅰ～Ⅴ）。以上试验每处理均接种10瓶，每瓶接种1个外植体。于光照培养箱中培养，培养条件为：温度（25±1） ℃，光照度为2 000 Lx，光照时间为12 h/d。
2结果与分析
2.1不同外植体对愈伤组织诱导的影响
将多年生、二年生和一年生叶片中部所取的片段作为外植体，各接种10瓶在诱导培养基中，于培养箱中培养40 d（表1）。另将当年生叶片的叶鞘部、中部和顶部所取的片段作为外植体，各接种10瓶在诱导培养基中，放在恒温培养箱中培养40 d（表2）研究发现，一年生叶片中部外植体所产生愈伤组织的能力要大于二年生和多年生叶片；嫩叶中部产生愈伤组织的效果最好，愈伤组织诱导倍数达到1.88。综合考虑，选择一年生叶片的中部作为愈伤组织诱导的外植体，可达到较好的诱导效果（图1-a、图1-b）。
2.22，4-D 对愈伤组织诱导的影响
2，4-D 对愈伤组织诱导有着重要影响，适当浓度的 2，4-D有利于愈伤组织的诱导，其中2.0 mg/L 2，4-D与0.5 mg/L 6-BA、NAA时的组合诱导效果最好，且诱导出来的愈伤组织颜色淡黄、结构疏松（图1-b、表3）。
2.4试管苗生根培养基的筛选
由以上试验愈伤组织诱导出来的芽生长至3～4 cm长后，接种到Ⅰ～Ⅴ 5种生根培养基进行根诱导培养30 d后发现，没有添加NAA的Ⅰ号生长出的根数少，而且根的长度也相对较短，生根率也低，Ⅲ～Ⅴ号的生根率都是100%，根的长度上也相差不大，但Ⅲ号的根数明显比其他3种要多，另外Ⅲ号和Ⅳ号所长出的根均比较饱满粗壮。总体来看，Ⅲ号生根培养基对试管苗根诱导效果最好（图1-e、图1-f、表5）。
3讨论
本研究表明，在植物组织培养中不同器官及部位作为外植体，其芽或愈伤组织的诱导率差异较大，因此必须依据材料的特点，选取较易表达全能性的器官及部位，这样不但能降低植物组织培养的难度，而且能达到最佳效果。例如在金边虎尾兰组织培养中，最好的外植体是金边虎尾兰嫩叶片的中部叶片，培养过程中的基部叶片细胞生长缓慢，叶顶部细胞容易死[CM（25]亡。本试验揭示了2，4-D、6-BA、NAA等激素在诱导叶片愈伤组织形成的影响，其中2，4-D 对愈伤组织诱导有着关键性作用，以2.0 mg/L 2，4-D再附加0.5 mg/L 6-BA、05 mg/L NAA的激素组合诱导效果最好；1.0 mg/L NAA促进试管苗生根的效果最好。
参考文献：
[1]林丽仙，谢志南，苏明华，等. 虎尾兰吸收甲醛及其保护酶活性的初步研究[J]. 福建农业学报，2009，24（3）：258-261.
[2]李泽鸿，张 璐，刘文涛，等. 虎皮兰中4种重金属元素的含量测定[J]. 北方园艺，2010（1）：153-154.
[3]林越平，王凤兰，黄子锋. 金边虎尾兰的栽培管理技术[J]. 农业与技术，2008，28（3）：89-90.[HJ1.8mm]
[4]周宇，闫国华，张开春，等. 虎尾兰叶片切段扦插育苗技术[J]. 中国花卉园艺（技术版），2006（4）：25.
[5]刘建雄，李淘涛. 虎尾兰外植体的组织培养[J]. 植物生理学通讯，1987，54（4）：54.
[6]黄凤兰，李静，张茜，等. 虎尾兰的组织培养技术研究[J]. 东北农业大学学报，2012，43（1）：131-136.
[7]谢怡青，温清英. 金边虎尾兰的组织培养和快速繁殖[J]. 农业科技通讯，2007 （6）：56.