【摘 要】
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目的：构建研究H-Ras12V突变蛋白的表达载体,并在体外进行表达和检测.方法：从细胞中分离提取RNA,通过RT-PCR扩增获得人的正常H-RascDNA,测序鉴定.通过PCR介导的定向突变的方法,
【机 构】
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第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室,第四军医大学唐都医院血液科
【基金项目】
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科技部“973”计划项目（2009CB521706）
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目的：构建研究H-Ras12V突变蛋白的表达载体,并在体外进行表达和检测.方法：从细胞中分离提取RNA,通过RT-PCR扩增获得人的正常H-RascDNA,测序鉴定.通过PCR介导的定向突变的方法,在其第12位氨基酸处引入一个错义突变G→V,连入测序载体进行鉴定.应用DNA重组技术,将获得的H-Ras12VcDNA插入真核表达载体pEGFP-C2,使用限制性酶切反应鉴定.通过脂质体将重组质粒转染入Hela细胞,使用Western Blot对其融合蛋白进行检测.结果：经过XhoI和BamHI的双酶切以及测序
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