目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)对宫颈癌细胞系HeLa细胞中人乳头状瘤病毒(HPV)18型E6、E7 mRNA表达的干扰作用.方法采用体外转录方法合成HPV18E6、E7 siRNA,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定HeLa细胞活性[以吸光度(A)值表示],筛选出最适宜转染浓度.通过阳离子脂质体将HPV18E6、E7 siRNA转染入靶细胞HeLa细胞中.实验分为3组,E6转染组(转染HPV18E6 siRNA),E7转染组(转染HPV18E7 siRNA),设未转染细胞为对照组.RT-PCR技术分别检测转染24、48、72 h后HeLa细胞中HPV18E6、E7 mRNA的表达.流式细胞仪检测细胞周期.结果MTT比色法检测结果显示,HPV18E6、E7 siRNA的最适宜转染浓度为20 pmol/L,以此浓度HPV18E6、E7 siRNA转染后,E6转染组细胞活性为0.57±0.05,E7转染组细胞活性为0.62±0.04,分别与对照组的0.87±0.05比较,差异有统计学意义(P<0.05).E6转染组转染前HPV18E6 mRNA表达水平为0.63±0.04,转染后24、48、72 h,其表达水平分别为0.53±0.04、0.46±0.02、0.56±0.03;E7转染组转染前HPV18E7 mRNA的表达水平为0.66±0.03,转染后分别为0.60±0.05、0.52±0.04、0.59±0.02,E6、E7转染组各转染时间点分别与其转染前比较,差异均有统计学意义(P< 0.05).E6转染组S期细胞比例最低为(0±5.5)%,G2期细胞最高为(66.9±3.5)%;E7转染组S期细胞比例最低为(5.6±4.2)%,G2期细胞最高为(47.2±0.5)%,E6、E7转染组各细胞周期分别与对照组[S期细胞为(39.4±0.4)%,G2期细胞为(1.4±1.2)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论宫颈癌HeLa细胞中存在RNA干扰现象,对外源性HPV18E6、E7 siRNA的干扰具有特异性。
小分子干扰RNA对子宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒18型E6、E7mRNA表达的影响
【摘 要】
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目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)对宫颈癌细胞系HeLa细胞中人乳头状瘤病毒(HPV)18型E6、E7 mRNA表达的干扰作用.方法采用体外转录方法合成HPV18E6、E7 siRNA,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定HeLa细胞活性[以吸光度(A)值表示],筛选出最适宜转染浓度.通过阳离子脂质体将HPV18E6、E7 siRNA转染入靶细胞HeLa细胞中.实验分为3组,E6转染组(转染
【机 构】
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266003,青岛大学医学院附属医院妇产科,266003,青岛大学医学院附属医院妇产科,266003,青岛大学医学院附属医院微生物实验室,266003,青岛大学医学院附属医院妇产科
【发表日期】
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2006年41期
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