【摘 要】
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目的 探讨GLi1是否通过调控自噬参与脂多糖诱导的脓毒血症体外模型.方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2细胞系,LPS处理浓度梯度为0μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80μg/ml,24 h后CCK8测细胞活性,并收集蛋白;时间梯度为40μg/ml的LPS处理细胞Oh、6h、12 h、24 h后CCK8测细胞活性,收集蛋白,进行WB检测相关蛋白表达.用10 μmol/L的GLi1抑制剂GANT61,以及自噬抑制剂3-MA、CQ分别联合40 μg/ml的LPS处理细胞24h
【机 构】
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温州医科大学附属黄岩医院台州市第一人民医院急诊科,浙江台州318020;台州职业技术学院医学与制药工程,浙江台州318000;温州医科大学附属黄岩医院台州市第一人民医院检验科实验组,浙江台州31802
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目的 探讨GLi1是否通过调控自噬参与脂多糖诱导的脓毒血症体外模型.方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2细胞系,LPS处理浓度梯度为0μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80μg/ml,24 h后CCK8测细胞活性,并收集蛋白;时间梯度为40μg/ml的LPS处理细胞Oh、6h、12 h、24 h后CCK8测细胞活性,收集蛋白,进行WB检测相关蛋白表达.用10 μmol/L的GLi1抑制剂GANT61,以及自噬抑制剂3-MA、CQ分别联合40 μg/ml的LPS处理细胞24h后,CCK8测细胞活性,收集蛋白,进行WB检测相关蛋白表达,并进行相关凋亡检测.结果 HK-2细胞活性随LPS浓度升高而降低,并呈现时间依赖性;同时GLi1、LC3B、P62蛋白表达也均随LPS浓度升高呈递增趋势.自噬抑制剂3-MA、CQ抑制自噬水平,并缓解了LPS诱导的细胞凋亡;GANT61处理抑制了GLi1的表达,同时降低了自噬水平,显著提高了LPS处理后HK-2细胞活性、减少凋亡.结论 脂多糖LPS能够诱导HK-2细胞凋亡,GLi1蛋白表达升高,并激活自噬;而抑制自噬或抑制GLi1的表达能够缓解LPS诱导的HK-2细胞凋亡.表明GLi1很可能通过调控自噬参与脂多糖诱导的HK-2细胞凋亡.
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