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摘 要 目的：探討肿瘤坏死因子（TNF-α）测定对诊断结核性胸液的价值。方法：采用双抗体夹心ELISA法对结核性及癌性胸液TNF-α测定。结果：结核性胸膜炎组TNF-α与恶性胸腔积液组差异有显著性（P＜0.01）。对诊断结核性胸膜炎的敏感性是85.3%，特异度是83.3%。结论：TNF-α测定对结核性胸膜炎的诊断具有一定临床意义。
关键词 结核性 胸液 诊断
资料及方法
2006年12月～2007年12月的64例胸液标本为吉林大学第一医院呼吸科、肿瘤科及长春市传染病医院住院患者标本，并明确诊断。64例病例随机分为两组。结核性胸膜炎组34例，其中男20例，女14例，年龄18～67岁。诊断标准：①有结核中毒症状；②伴有肺部结核病灶；③胸水为渗出性改变；④抗结核治疗2～4周有效，且胸水吸收快；⑤痰涂片或痰培养找到结核杆菌；⑥胸水中找到抗酸杆菌；⑦胸膜活组织检查病理有典型的结核改变。恶性胸腔积液组30例，其中男23例，女7例，年龄47～73岁，均经病理学或细胞学检查明确。健康对照组20例，均系健康工作人员。
检测方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA），严格按试剂盒所附说明进行操作。具体步骤：①设标准曲线的TNF-α标准浓度（500、250、125、62.5、31.25、15.60pg/ml）；②加入已按要求倍数稀释的TNF-α标准液和标本100μl至相应孔内，用封板胶纸封住反应孔。室温（20～25℃）120分钟；③按洗涤方法洗板；④除空白孔外，每孔加按说明要求稀释的生物素标注的二抗100μl，封住板孔。室温（20～25℃）90分钟；⑤按洗涤方法洗板；⑥除空白孔外，每孔加已按要求稀释的酶联物100μl，封住板孔。室温（20～25℃）30分钟；⑦按洗涤方法洗板；⑧每孔加底物A、B（各1滴或50μl/孔）避光10～30分钟，视显色情况灵活掌握；⑨每孔加终止液50μl，即刻在450nm酶标仪测定标本的吸光度，画出标准曲线，由标准曲线算出标本的TNF-α水平。
统计学处理；实验结果用pg/ml表示，先行方差分析，然后两样本均数比较用t检验。
结 果
结核性胸膜炎组血清和胸腔液TNF-α（303.7±79.9pg/ml）明显高于恶性胸腔积液组（56.7±36.3pg/ml），经统计学处理，P＜0.01。两组血清TNF-α含量（48.2±8.9pg/ml、47.3±6.5pg/ml）比较无显著差异（P＞0.05）。结核性胸膜炎TNF-α水平明显高于血清含量（P＜0.01），可见两者之间无相关性。结核性胸液TNF-α＞75pg/ml［1］29例。恶性组5例阳性。
胸液和血清TNF-α水平（X±S）：结核组胸液303.7±79.9 pg/ml，血清48.2±8.9pg/ml；恶性组胸液56.7±36.3pg/ml，血清47.3±6.5pg/ml；健康对照组血清40.2±2.1pg/ml。见表1。
讨 论
胸膜炎是胸膜的炎症，可由于感染（细菌、病毒、霉菌、阿米巴、肺吸虫等）、肿瘤、变态反应、化学性和创伤性等多种疾病所引起。结核性胸膜炎，属于肺结核病5大类型的V型，其虽非肺部病变，但在临床上与肺结核有密切关系。TNF-α是结核性胸膜炎局部免疫应答产物，从20世纪80年代开始受到国外学者的注意，结核性胸膜炎胸水中TNF-α等细胞因子浓度增高，提示结核性胸膜炎局部免疫功能增强，其诊断结核性胸膜炎的敏感性和特异性分别可达到100%和93%，因此有一定局限性。TNF-α［2］是由单核细胞和巨噬细胞产生的一种多肽类细胞因子，介导多向炎症反应和免疫调节反应，具有抗感染和抗肿瘤等多种生物学活性，结核性胸水中巨噬细胞功能十分活跃，在结核杆菌细胞壁的蛋白-肽多糖复合物和阿拉伯聚糖酯刺激下激发胸液单核细胞引起依赖性肿瘤坏死因子释放。本研究表明结核性胸膜炎组胸液中TNF-α水平均明显高于恶性胸腔积液组（P＜0.01），且结核性胸液与血清中二者含量无相关性，进一步说明其局部细胞免疫功能增强。本研究结果显示恶性胸腔积液组TNF-α含量显著低于结核性胸膜炎组。结核性胸膜炎组TNF-α含量是恶性胸腔积液组的2～ 5倍，与文献报道基本一致［3］。以胸液TNF-α＞75pg/ml作为临界值，其诊断结核性胸膜炎的敏感性、特异性分别为85.3%、83.3%。通过对结核性胸腔积液和恶性胸腔积液TNF-α含量测定研究，我们认为：①TNF-α在结核性胸膜炎和恶性胸腔积液的发生、发展、病理生理改变起着重要作用；②结核性胸腔积液中TNF-α含量明显高于恶性胸腔积液组，具有显著差异，有助于结核性和恶性胸腔积液的鉴别。③胸液中TNF-α的检测为结核性胸膜炎的诊断提供了一项辅助手段，具有一定的临床意义。
参考文献
1 Miyazaki Y,Koga H, Kohno S，et al.Nested,poly merasechain re-action for detection of mycobactenium.tuberculo-sisin chinica/sampiest clin microbio,1993,31:2228.
2 LshiiYuChiYama Y,Heasegwa S.Detection of tumornecro-sis factor/ca checitin pieura/eff usion of patients with lung cancer.Cancer Clin EXPImmunol,1990,80:350.
3 Luisvalase Estner san Joes De Via Aivar ez，et al.Diangnosis of Tuberculous pieurisy using the Biologie Parameters Aaeno-sine Deaninase Lysotyme and Inte feron Gamma.Chest,1993,103:458.
关键词 结核性 胸液 诊断
资料及方法
2006年12月～2007年12月的64例胸液标本为吉林大学第一医院呼吸科、肿瘤科及长春市传染病医院住院患者标本，并明确诊断。64例病例随机分为两组。结核性胸膜炎组34例，其中男20例，女14例，年龄18～67岁。诊断标准：①有结核中毒症状；②伴有肺部结核病灶；③胸水为渗出性改变；④抗结核治疗2～4周有效，且胸水吸收快；⑤痰涂片或痰培养找到结核杆菌；⑥胸水中找到抗酸杆菌；⑦胸膜活组织检查病理有典型的结核改变。恶性胸腔积液组30例，其中男23例，女7例，年龄47～73岁，均经病理学或细胞学检查明确。健康对照组20例，均系健康工作人员。
检测方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA），严格按试剂盒所附说明进行操作。具体步骤：①设标准曲线的TNF-α标准浓度（500、250、125、62.5、31.25、15.60pg/ml）；②加入已按要求倍数稀释的TNF-α标准液和标本100μl至相应孔内，用封板胶纸封住反应孔。室温（20～25℃）120分钟；③按洗涤方法洗板；④除空白孔外，每孔加按说明要求稀释的生物素标注的二抗100μl，封住板孔。室温（20～25℃）90分钟；⑤按洗涤方法洗板；⑥除空白孔外，每孔加已按要求稀释的酶联物100μl，封住板孔。室温（20～25℃）30分钟；⑦按洗涤方法洗板；⑧每孔加底物A、B（各1滴或50μl/孔）避光10～30分钟，视显色情况灵活掌握；⑨每孔加终止液50μl，即刻在450nm酶标仪测定标本的吸光度，画出标准曲线，由标准曲线算出标本的TNF-α水平。
统计学处理；实验结果用pg/ml表示，先行方差分析，然后两样本均数比较用t检验。
结 果
结核性胸膜炎组血清和胸腔液TNF-α（303.7±79.9pg/ml）明显高于恶性胸腔积液组（56.7±36.3pg/ml），经统计学处理，P＜0.01。两组血清TNF-α含量（48.2±8.9pg/ml、47.3±6.5pg/ml）比较无显著差异（P＞0.05）。结核性胸膜炎TNF-α水平明显高于血清含量（P＜0.01），可见两者之间无相关性。结核性胸液TNF-α＞75pg/ml［1］29例。恶性组5例阳性。
胸液和血清TNF-α水平（X±S）：结核组胸液303.7±79.9 pg/ml，血清48.2±8.9pg/ml；恶性组胸液56.7±36.3pg/ml，血清47.3±6.5pg/ml；健康对照组血清40.2±2.1pg/ml。见表1。
讨 论
胸膜炎是胸膜的炎症，可由于感染（细菌、病毒、霉菌、阿米巴、肺吸虫等）、肿瘤、变态反应、化学性和创伤性等多种疾病所引起。结核性胸膜炎，属于肺结核病5大类型的V型，其虽非肺部病变，但在临床上与肺结核有密切关系。TNF-α是结核性胸膜炎局部免疫应答产物，从20世纪80年代开始受到国外学者的注意，结核性胸膜炎胸水中TNF-α等细胞因子浓度增高，提示结核性胸膜炎局部免疫功能增强，其诊断结核性胸膜炎的敏感性和特异性分别可达到100%和93%，因此有一定局限性。TNF-α［2］是由单核细胞和巨噬细胞产生的一种多肽类细胞因子，介导多向炎症反应和免疫调节反应，具有抗感染和抗肿瘤等多种生物学活性，结核性胸水中巨噬细胞功能十分活跃，在结核杆菌细胞壁的蛋白-肽多糖复合物和阿拉伯聚糖酯刺激下激发胸液单核细胞引起依赖性肿瘤坏死因子释放。本研究表明结核性胸膜炎组胸液中TNF-α水平均明显高于恶性胸腔积液组（P＜0.01），且结核性胸液与血清中二者含量无相关性，进一步说明其局部细胞免疫功能增强。本研究结果显示恶性胸腔积液组TNF-α含量显著低于结核性胸膜炎组。结核性胸膜炎组TNF-α含量是恶性胸腔积液组的2～ 5倍，与文献报道基本一致［3］。以胸液TNF-α＞75pg/ml作为临界值，其诊断结核性胸膜炎的敏感性、特异性分别为85.3%、83.3%。通过对结核性胸腔积液和恶性胸腔积液TNF-α含量测定研究，我们认为：①TNF-α在结核性胸膜炎和恶性胸腔积液的发生、发展、病理生理改变起着重要作用；②结核性胸腔积液中TNF-α含量明显高于恶性胸腔积液组，具有显著差异，有助于结核性和恶性胸腔积液的鉴别。③胸液中TNF-α的检测为结核性胸膜炎的诊断提供了一项辅助手段，具有一定的临床意义。
参考文献
1 Miyazaki Y,Koga H, Kohno S，et al.Nested,poly merasechain re-action for detection of mycobactenium.tuberculo-sisin chinica/sampiest clin microbio,1993,31:2228.
2 LshiiYuChiYama Y,Heasegwa S.Detection of tumornecro-sis factor/ca checitin pieura/eff usion of patients with lung cancer.Cancer Clin EXPImmunol,1990,80:350.
3 Luisvalase Estner san Joes De Via Aivar ez，et al.Diangnosis of Tuberculous pieurisy using the Biologie Parameters Aaeno-sine Deaninase Lysotyme and Inte feron Gamma.Chest,1993,103:458.