【摘 要】
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目的 探讨通过构建酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)基因真核表达载体转染大鼠肌卫星细胞(MSCs)建立细胞工程种子细胞可行性.方法 首先提取人类肌肉组织总RNA,RT-PCR法调取aFGF基因,然后用直接化学合成法合成人类白细胞介素2信号肽序列(SPS),通过基因融合得到SPS-aFGF,再通过定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,最终得到重组质粒PEGFP-N1-SPS-aFGF,对重组质粒做
【机 构】
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510282广州,南方医科大学珠江医院骨科,510282广州,南方医科大学珠江医院骨科,广州市海珠区石溪中医医院针灸科,510282广州,南方医科大学珠江医院骨科,510282广州,南方医科大学珠江医
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目的 探讨通过构建酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)基因真核表达载体转染大鼠肌卫星细胞(MSCs)建立细胞工程种子细胞可行性.方法 首先提取人类肌肉组织总RNA,RT-PCR法调取aFGF基因,然后用直接化学合成法合成人类白细胞介素2信号肽序列(SPS),通过基因融合得到SPS-aFGF,再通过定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,最终得到重组质粒PEGFP-N1-SPS-aFGF,对重组质粒做测序和酶切鉴定;差速贴壁法获取大鼠MSCs,观察细胞形态,做免疫荧光鉴定;经鉴定正确的细胞随机分为3组:目的基因组(aFGF加N1)、空载质粒组(N1)、空白对照组(blank),前两组分别加入质粒PEGFP-N 1-SPS-aFGF与pEGFP-N1质粒,空白对照不加入任何质粒,均在脂质体Lipofectamine 2000TMReagent介导下转染,转染后荧光显微镜统计发绿色荧光的细胞占各组细胞比例,计算转染效率;转染72h后利用实时荧光定量PCR与Western blot检测aFGF基因在MSCs中表达情况.结果 ①重组质粒测序结果与GenBank公布的序列一致,酶切鉴定条带与实际大小相符.②荧光显微镜下观察到转染细胞有荧光表达,并在转染72 h达到最高峰.③转染后72 h,实时荧光定量PCR结果显示目的基因组表达量平均相对比值(aFGF加N1)组(1464.96)显著高于N1组(1.016)、Blank组(1.000),差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测显示aFGF表达呈极强阳性,而N1组及Blank组aFGF表达极弱.结论 成功构建aFGF基因真核表达载体并转染MSCs,aFGF在MSCs内高表达,此种方法有希望获取具备特殊生物学功能细胞。
其他文献
目的 探讨利用游离股前外侧穿支皮瓣或隐动脉穿支皮瓣修复足踝部软组织缺损的效果及手术技术.方法 2006年8月至2012年4月,对足踝部软组织缺损患者25例,创面范围4.0cm×5.5 cm～11.0 cm×23.0 cm.其中,足背软组织缺损采用游离股前外侧穿支皮瓣修复20例,足底软组织缺损采用游离隐动脉穿支皮瓣修复5例.结果 术后25例皮瓣全部成活.术后随访3～ 50个月,平均(18.0±0.8
穿支皮瓣隶属于传统的轴型皮瓣，是传统轴型皮瓣在小型化、精细化、薄型化和微创化方面的新发展。由唐茂林、徐永清、张世民教授主编的专著《穿支皮瓣的应用解剖与临床》已由科学出版社于2013年3月出版。该书从穿支的血管形态学基础人手，在详尽介绍穿支的研究方法、穿支的来源、定位及其分布规律与皮瓣设计方法的同时，结合临床病例，具体介绍了一些常用的穿支皮瓣手术设计与应用原则。书中参考文献均应用文献管理软件EndN
良好的血液循环通路——体内动-静脉瘘是保证血液透析顺利进行的首要条件.因此,保护好动-静脉内瘘、减少并发症的发生是直接影响到患者长期存活和透析效果的重要因素。
目的 应用桡骨远端骨膜瓣治疗手舟骨陈旧性骨折的临床疗效. 方法 2007年10月至2011年6月,对11例手舟骨骨不连患者采用桡骨远端骨膜瓣进行治疗.其中手舟骨腰部骨不连8例,手舟骨近端骨不连3例.切取桡骨骨膜瓣1.5 cm×4.0cm.术后定期复查X线片,随访骨折愈合时间、腕痛、腕关节活动度等情况.结果 术后失访1例,10例获随访6 ～ 24个月(平均为12个月),骨折均获得愈合,平均愈合时间为
指端、指腹缺损后采用指动脉逆行岛状皮瓣修复的报道很多,但报道小儿的较少[1-3].2007年6月至2010年1月,我院采用指动脉逆行岛状皮瓣修复小儿指端及指腹缺损11例,取得了良好的临床疗效.现报道如下。
腕部再植术后常发生手部内在肌挛缩、拇指对掌功能差、腕关节活动度受限等情况,需多次手术.2006年2月至2010年1月,我院收治7例利器致腕部离断病例,治疗效果较满意.资料与方法本组男6例,女1例,年龄15～34岁,均为利器致腕部完全离断.左侧5例,右侧2例,近侧列腕骨处离断4例,斜行离断1例.缺血时间最长10 h,最短2h,平均5h.手术方法:首先固定骨折,远侧桡骨离断的2例行交叉克氏针固定;近侧
目的 探讨应用显微外科技术治疗老年人腕管综合征的临床疗效. 方法 自2005年10月至2011年7月,对收治的28例老年腕管综合征患者,采用掌部纵形小切口,切断腕横韧带,应用显微外科技术行正中神经松解、减压,术后辅以神经营养药物等治疗. 结果 术后所有患者切口均一期愈合,无并发症发生.术后随访6～24个月,平均18个月.症状完全消失24例,占全部随访病例的85.7％；仍有部分症状残留2例,占全部随
2012年5月3-10日，中华医学会显微外科学分会参访团一行在裴国献主任委员带领下赴中国台湾参观访问，与台湾骨科同行进行了友好、深入的交流。，在台期间，代表团参观了台湾三军总医院、台北荣民总医院、阳明大学骨科器材研发中心、秀传亚洲远距微创手术培训中心、彰滨秀传纪念医院。
中国人民解放军手外科医学专科中心，解放军第四。一医院手外科以手指再植与再造及显微外科技术在四肢创伤的修复与重建为技术特色，30年来积累了丰富经验。为推广和提高拇手指再造及皮瓣修复的基础理论和技术，定于2012年9月16-23日在青岛市举办“全国第十七期手外科学习班暨第九期手功能康复学习班”，由全军手外科中心数位著名专家教授授课并进行手术示教、穿插进行显微外科小血管吻合动物训练；手功能康复学习班由“
宁波市第六医院手外科是浙江省级重点（扶植）学科、宁波市重点学科。学科成立于1994年．经过10余年的发展，学科建设日益完善．从一个只有几十张床位的卫生院开始逐渐发展为集医、教、研于一体的手外科诊疗中心。在急诊手外伤、