【摘 要】
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目的:探讨polδ最小亚基POLD4在吸烟所致肺癌中的机制.方法:利用烟草中主要致癌物质苯并芘类似物4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)处理肺癌细胞株A549,通过Western blotting方法检测POLD4蛋白的表达量,进而通过蛋白酶活性抑制剂MG132干预观察蛋白表达量的变化.通过siRNA技术下调POLD4表达水平观察对不同细胞毒性药物的敏感性,为进一步验证POLD4表达水平在细胞修复中的作用,利用已构建的Flag-POLD4-pcDNA3质粒转染POLD4低表达的小细胞肺癌细胞株SK3得到P
【机 构】
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福建医科大学附属第二医院呼吸与危重症医学科,福建 泉州 362000;罗湖区人民医院呼吸与危重症医学科,广东 深圳 518001;福建医科大学附属第二医院呼吸与危重症医学科,福建 泉州 362000;
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目的:探讨polδ最小亚基POLD4在吸烟所致肺癌中的机制.方法:利用烟草中主要致癌物质苯并芘类似物4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)处理肺癌细胞株A549,通过Western blotting方法检测POLD4蛋白的表达量,进而通过蛋白酶活性抑制剂MG132干预观察蛋白表达量的变化.通过siRNA技术下调POLD4表达水平观察对不同细胞毒性药物的敏感性,为进一步验证POLD4表达水平在细胞修复中的作用,利用已构建的Flag-POLD4-pcDNA3质粒转染POLD4低表达的小细胞肺癌细胞株SK3得到POLD4过表达的SK3-D4-1及SK3-D4-2稳定转染细胞进行挽救实验.结果:肺癌细胞株A549经4NQO处理后POLD4蛋白表达量下降,随着浓度的增高(0μmol/L、0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.4μmol/L),蛋白表达量逐渐下降了44％、57％及77％;通过蛋白酶活性抑制剂MG132能干预4NQO所致的POLD4蛋白表达量下降,使蛋白表达量上升约179％.利用siRNA技术下调A549细胞株POLD4表达水平增强对4NQO的敏感性,但对紫杉醇(Taxol)的敏感性却与POLD4的表达水平无关,在挽救实验中POLD4过表达的SK3呈现出对4NQO敏感性降低的结果.结论:吸烟可能导致POLD4表达下降进而削弱DNA修复能力最终导致肺癌.
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