【摘 要】
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构建了山羊肝脏cDNA文库,采用平板裂解法提取噬菌体DNA,以此为模板用所设计的引物以PCR法扩增出-μcalpain激活蛋白UK114基因,并克隆到pGEM-T easy载体。序列分析表明,UK114
【机 构】
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山西农业大学生命科学学院,中国农业大学食品学院,山西农业大学动物科技学院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30271003);山西省科技攻关项目(011030);山西省青年基金资助项目(20021038)
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构建了山羊肝脏cDNA文库,采用平板裂解法提取噬菌体DNA,以此为模板用所设计的引物以PCR法扩增出-μcalpain激活蛋白UK114基因,并克隆到pGEM-T easy载体。序列分析表明,UK114 cDNA包括起始密码子和终止密码子在内全长共计1 017 bp,5′非编码区长为39 bp,3′非编码区长为567 bp,编码区长411 bp,编码137个氨基酸序列。与GenBank中Colombo等所得UK114基因比较表明:在5′非编码区,UK114为102 bp,克隆的UK114为39 bp,且二者仅有9个核苷酸序列是相同的;紧接着是起始密码子ATG,然后是一个411 bp的阅读框(40 nt~450 nt),编码137个氨基酸,理论分子量约为15 ku,二者在编码区仅有1个bp不同,为无义突变;在3′非编码区为552 bp,所克隆的UK114为567 bp,二者在此区域有57个核苷酸序列是不同的:UK114为polyA,所克隆的是不同的核苷酸。二者的同源性为91%,突变的86个核苷酸中都为无义突变,开放阅读框中仅有一个核苷酸突变。
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