【摘 要】
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目的 建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monoc ytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特
【机 构】
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黄埔出入境检验检疫局,广东出入境检验检疫局,中国检验检疫科学研究院
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目的 建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monoc ytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因进行了检测,分析3个毒力基因在多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚类群组中的分布情况.方法 根据单增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列设计引物和小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针建立三重荧光PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行了测试,并对分离的101株单增李斯特菌进行三重PCR检测.结果 建立的三重实时荧光PCR方法特异于单增李斯特菌的检测,重复性良好,组内Ct值变异系数均小于1.5％,灵敏度可达100 CFU/mL.对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的检出率分别为98％、75％和98％.在可被MLST分型的89株菌株中,groupⅠ的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupⅡ的57株菌株中有56株三个基因均检出;groupⅢ的菌株hlyA、inlA和plcB三个基因均未检出.结论 本文建立的三重实时荧光PCR方法能准确、快速、稳定的检测单增李斯特菌,101株单增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三个毒力基因的检出情况与单增李斯特菌的MLST分型聚类有较一致的关系,对分析单增李斯特菌毒力的强弱有重要参考意义.
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