【摘 要】
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目的探讨利用肿瘤特异性启动子PEG3驱动MRI报告基因铁蛋白重链(ferritin heavy chain 1, FTH1)在干细胞瘤变时特异性表达并进行MRI检测的可行性。方法构建PEG3启动子控制FTH1
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院放射科; 重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(81771892)~~
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目的探讨利用肿瘤特异性启动子PEG3驱动MRI报告基因铁蛋白重链(ferritin heavy chain 1, FTH1)在干细胞瘤变时特异性表达并进行MRI检测的可行性。方法构建PEG3启动子控制FTH1表达的病毒载体PEG3-FTH1-LV,感染大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs),获得MSCs-PEG3-FTH1细胞,MSCs和MSCs-CMV-FTH1作为对照,通过与大鼠胶质瘤细胞C6间接共培养2周诱导其瘤变为TMSCs、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1。观察细胞形态,检测细胞迁移能力、细胞增殖速度及细胞表面抗体CD29、CD34、CD45、CD90的表达,裸鼠皮下成瘤实验验证细胞瘤变,Western blot、普鲁士蓝染色、细胞透射电镜和磁共振成像(MRI)检测细胞诱导前后FTH1基因的表达。结果 TMSCs细胞较MSCs细胞变小,多呈纺锤状,增殖速度加快,迁移能力增强,CD34、CD45表达增加,CD90表达减少(P<0.05),裸鼠皮下成瘤阳性;Western blot结果显示:MSCs、MSCs-PEG3-FTH1、TMSCs细胞不表达或少量表达FTH1蛋白,而MSCs-CMV-FTH1、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1细胞均大量表达FTH1蛋白(P<0.05);普鲁士蓝染色和细胞透射电镜观察到MSCs-CMV-FTH1、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1细胞内铁颗粒,而在MSCs、MSCs-PEG3-FTH1、TMSCs细胞内无明显铁颗粒,MRI显示TMSCs-PEG3-FTH1细胞信号较MSCs-PEG3-FTH1细胞信号明显降低。结论 PEG3启动子可驱动报告基因FTH1在干细胞瘤变时特异性表达并能被MRI检测。
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