目的建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性。方法运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定性,在5L生物反应器中扩大培养;接种流感和禽流感病毒,测定不同时间HA效价、CCID₅₀滴度,分析其病毒敏感性。结果成功将ATCC引进的贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞（命名为MDCK-XF02细胞）并冻存;不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度均达13.0×10⁶ cells/mL以上,且差异无统计学意义（P>0.05）;连续传代培养过程中细胞形态和生长状况稳定,比生长速率差异无统计学意义（P>0.05）;三个代次的MDCK-XF02细胞以2.0×10⁶ cells/mL接种于5 L生物反应器,细胞生长状态良好,倍增时间小于21 h,在批培养中细胞浓度高达（14.57±0.47）×10⁶ cells/mL,比生长速率分别为（0.027±0.012）h^-1、（0.028±0.013）h^-1、（0.027±0.013）h^-1（P>0.05）;接种甲型流感病毒H1N1和H3N2,HA效价达到（6～7）log₂HA/25μL、CCID₅₀为（4.35～4.68）lgCCID₅₀/mL;接种乙型流感病毒B/P和BX-35增殖效果更好,HA效价达到（9～10）log₂HA/25μL,CCID₅₀为（6.38～7.31）lgCCID₅₀/mL。接种重组禽流感病毒H5亚型Re-5、Re-6、Re-10均能很好的增殖,HA效价达到（7～9）log₂HA/25μL、CCID₅₀为（6.21～6.96）lgCCID₅₀/mL。结论本研究获得一株具有自主知识产权的流感/禽流感病毒敏感的无血清悬浮培养型MDCK-XF02细胞株,实现了生物反应器高密度放大培养,为我国开展流感疫苗研究和生产提供细胞基质,也为其他动物细胞悬浮驯化提供参考。