【摘 要】
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为了建立一种快速、灵敏、特异的水禽圆环病毒检测方法，试验根据GenBank中已公布的鸭圆环病毒（DuCV）和鹅圆环病毒（GoCV）的Rep基因序列设计3条特异性引物，对扩增条件进行优化，并检验优化后方法的特异性和灵敏性，最后用建立的水禽圆环病毒巢式PCR检测方法对40份疑似水禽圆环病毒感染的病料进行检测。结果表明：水禽圆环病毒巢式PCR方法可成功扩增出719 bp和543 bp的目的片段；优化后的
【机 构】
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佛山科学技术学院生命科学与工程学院
【基金项目】
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广东省现代农业产业技术体系创新团队项目（2019KJ137）； 广东省基础与应用基础研究区域联合基金-青年基金项目（2019A1515110157）； 广东省教育厅普通高校重点领域专项（乡村振兴）（2020ZDZX1004）;广东省教育厅青年创新人才项目（2018KQNCX277）；
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为了建立一种快速、灵敏、特异的水禽圆环病毒检测方法，试验根据GenBank中已公布的鸭圆环病毒（DuCV）和鹅圆环病毒（GoCV）的Rep基因序列设计3条特异性引物，对扩增条件进行优化，并检验优化后方法的特异性和灵敏性，最后用建立的水禽圆环病毒巢式PCR检测方法对40份疑似水禽圆环病毒感染的病料进行检测。结果表明：水禽圆环病毒巢式PCR方法可成功扩增出719 bp和543 bp的目的片段；优化后的一轮、二轮PCR中退火温度分别为50,56℃,引物加入量均为0.6μL,二轮PCR的模板稀释倍数为1×10~3倍。优化后的方法对水禽圆环病毒的检测具有较好的特异性，与鸭甲肝病毒1型（DHAV-1）、鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）、鸭坦布苏病毒（DTMUV）、H5N6亚型禽流感病毒（AIV）、H9N2 AIV、新城疫病毒（NDV）、鸭瘟病毒（DEV）、鹅细小病毒（GPV）及鹅星状病毒（GoAstV）均无交叉反应；该方法的最低检出限达4.04×10~2拷贝/μL,分别是一轮、二轮PCR最低检出限的1×10~4,1×10~3倍；利用该方法对肝脏病料进行检测，GoCV的阳性率为60%（12/20）,DuCV的阳性率为40%（8/20）。说明试验建立的巢式PCR检测方法可用于水禽圆环病毒的检测。
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