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【摘 要】 目的：采用薄层色谱法检查金银花配方颗粒中山银花的成分，灰毡毛忍冬皂苷乙为山银花专属含有成分，金银花中不含该成分，鉴别该成分以检查是金银花还是山银花或掺有山银花投料制成配方颗粒。方法：配方颗粒18批，采用薄层色谱法以灰毡毛忍冬皂苷乙对照品为对照鉴别金银花配方颗粒是否检出相对应斑点。结果：5批样品检出与灰毡毛忍冬皂苷乙对照品相应的斑点，可疑以山银花代替金银花投料或投料中掺有山银花。结论：该方法可有效检查金银花配方颗粒以山银花代替金银花投料或投料中掺有山银花。
【关键词】
金银花;山银花;检查;灰毡毛忍冬皂苷乙;薄层色谱
【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）19-0038-02
Establishment of test method for Lonicera japonica Flos granules
SUN Mingying SU Zhangxuan YANG Zhiye*
Department of Traditional Chinese Medicine， Guangdong Institute for Drug Control， NMPA Key Laboratory for Rapid Testing Technology of Drug， Guangzhou 510663， China
Abstract：
Objective To check the components of Lonicera japonica Thunb. in Lonicera japonica Thunb. Formula granules by TLC. Lonicera macranthoides saponin B is the exclusive component of Lonicera japonica Thunb. It does not exist in Lonicera japonica Thunb. To identify this component， it is necessary to check whether it is Lonicera japonica Thunb. or mixed with Lonicera japonica Thunb. Methods Eighteen batches of granules were formulated， and TLC was used to identify whether the corresponding spots were detected in honeysuckle granules with Lonicera macranthoides saponin B as control. Results The spots corresponding to Lonicera macranthoides saponin B control were detected in 5 batches of samples， and it was suspected that Lonicera macranthoides was used instead of Lonicera japonica Thunb. or mixed with Lonicera macranthoides Thunb. Conclusion This method can effectively check that Flos Lonicerae is used instead of Flos Lonicerae or mixed with Flos Lonicerae confusase.
Key words：
Lonicera japonica Thunb; Flos Lonicerae confusase; Check; Lonicera macranthoides Hand.-mazz; Thin layer chromatography
金銀花作为一种传统中药，包括有忍冬、华南忍冬、菰腺忍冬、水忍冬的花蕾。金银花为中医常用药，其味甘、寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等，应用历史悠久。金银花含绿原酸、异绿原酸、白果醇，还含挥发油其成分有芳樟醇、苯甲醇。由于金银花价格昂贵，市场上常有用山银花假冒或混淆金银花的现象。金银花与山银花来源不同[1]，山银花与金银花混用对于病患的健康很是不利[2]，因此建立以鉴别两者的方法很必要。以山银花特有成分灰毡毛忍冬皂苷乙[3-5]为对照物质，检查是否含有山银花，方法简便，专属性强[6]。本研究建立以灰毡毛忍冬皂苷乙为对照品的薄层色谱法鉴别金银花与山银花，经方法学考察，耐用性良好。
1 仪器与试药
1.1 仪器 CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER 4全自动点样仪;CAMAG REPROSTAR3 薄层色谱照相装置。
1.2 试药 灰毡毛忍冬皂苷乙对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111814-201102）。金银花配方颗粒18批，配方颗粒信息，见表1。Merck预制硅胶G薄层板，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品0.1 g，加水20 mL超声使溶解，加盐酸3滴，边加边搅拌，滤过，滤液加氢氧化钠试液调节pH值至7，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次30 mL，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。 2.2.2 对照药材溶液的制备 取本品0.1 g，加水20 mL超声处理30 min，滤过，滤液加盐酸3滴，同法制成对照药材溶液。
2.2.3 对照品溶液的制备 取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品（批号：111814-201102，中国食品药品生物制品研究院）加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.4 阴性对照溶液制备 取阴性对照0.1 g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.2 薄层色谱试验 照 2015 年版中国药典四部薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液5～10 μL、对照药材溶液、对照品溶液各2 μL、阴性对照溶液5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓水（6∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，日光下检视。如图1所示。
2.3 结果 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，13批不显相同颜色的斑点，5批显相同颜色的斑点。
3 讨论
3.1 试验结果 本试验采用薄层色谱检查方法检查金银花配方颗粒中以山银花代替金银花投料，或在金银花中掺如山银花投料。结果能有效地检出阳性样品，以作为金银花配方颗粒检查山银花的方法。18批样品检出5批阳性样品，对金银花配方颗粒中以山银花代替投料、在金银花中掺入山银花投料都能很好的檢验出来。
3.2 方法应用 薄层检查方法在微量掺杂方面可能因量的问题无法检出，但该方法在常规掺杂方面仍然可有效应用。灰毡毛忍冬皂苷乙可以作为区分金银花与山银花的指标成分，在金银花中不存在该成分，为山银花的有效成分，检测该成分可以鉴别金银花与山银花。
3.3 其他补充方向 掺杂检测方法除了薄层色谱，还可以建立高效液相色谱法，甚至质谱-色谱联用等方法补充验证，相互补充，提高方法准确度。
参考文献
[1]邹冬兰， 陈伟兰， 曹宝华.金银花及山银花的鉴别[J]. 神州药房，2009（11）：773.
[2]成差群，谭秀芬，钟碧莲.金银花和山银花的鉴别与归属[J].中国地方病防治杂志， 2017，32（6）：686-687.
[3]国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010 年版第一增补本[M]. 北京： 中国医药科技出版社，2010：79-80.
[4]肖宏华，甄诚，刘开玉. 薄层色谱法鉴别双黄连口服液中金银花成分的改进[J]. 首都医药，2013，20（24）：71-72.
[5]李红霞，王雪芹，李振国，等. 不同产地金银花与山银花主要成分的含量比较[J]. 中国药房，2011，22（31）：2935-2937.
[6]何远景.复方双花颗粒中金银花的定性鉴别标准提高研究[J].四川中医 ，2017，35（1）：53-56.
（收稿日期：2021-02-09 编辑：刘斌）
【关键词】
金银花;山银花;检查;灰毡毛忍冬皂苷乙;薄层色谱
【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）19-0038-02
Establishment of test method for Lonicera japonica Flos granules
SUN Mingying SU Zhangxuan YANG Zhiye*
Department of Traditional Chinese Medicine， Guangdong Institute for Drug Control， NMPA Key Laboratory for Rapid Testing Technology of Drug， Guangzhou 510663， China
Abstract：
Objective To check the components of Lonicera japonica Thunb. in Lonicera japonica Thunb. Formula granules by TLC. Lonicera macranthoides saponin B is the exclusive component of Lonicera japonica Thunb. It does not exist in Lonicera japonica Thunb. To identify this component， it is necessary to check whether it is Lonicera japonica Thunb. or mixed with Lonicera japonica Thunb. Methods Eighteen batches of granules were formulated， and TLC was used to identify whether the corresponding spots were detected in honeysuckle granules with Lonicera macranthoides saponin B as control. Results The spots corresponding to Lonicera macranthoides saponin B control were detected in 5 batches of samples， and it was suspected that Lonicera macranthoides was used instead of Lonicera japonica Thunb. or mixed with Lonicera macranthoides Thunb. Conclusion This method can effectively check that Flos Lonicerae is used instead of Flos Lonicerae or mixed with Flos Lonicerae confusase.
Key words：
Lonicera japonica Thunb; Flos Lonicerae confusase; Check; Lonicera macranthoides Hand.-mazz; Thin layer chromatography
金銀花作为一种传统中药，包括有忍冬、华南忍冬、菰腺忍冬、水忍冬的花蕾。金银花为中医常用药，其味甘、寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等，应用历史悠久。金银花含绿原酸、异绿原酸、白果醇，还含挥发油其成分有芳樟醇、苯甲醇。由于金银花价格昂贵，市场上常有用山银花假冒或混淆金银花的现象。金银花与山银花来源不同[1]，山银花与金银花混用对于病患的健康很是不利[2]，因此建立以鉴别两者的方法很必要。以山银花特有成分灰毡毛忍冬皂苷乙[3-5]为对照物质，检查是否含有山银花，方法简便，专属性强[6]。本研究建立以灰毡毛忍冬皂苷乙为对照品的薄层色谱法鉴别金银花与山银花，经方法学考察，耐用性良好。
1 仪器与试药
1.1 仪器 CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER 4全自动点样仪;CAMAG REPROSTAR3 薄层色谱照相装置。
1.2 试药 灰毡毛忍冬皂苷乙对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111814-201102）。金银花配方颗粒18批，配方颗粒信息，见表1。Merck预制硅胶G薄层板，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品0.1 g，加水20 mL超声使溶解，加盐酸3滴，边加边搅拌，滤过，滤液加氢氧化钠试液调节pH值至7，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次30 mL，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。 2.2.2 对照药材溶液的制备 取本品0.1 g，加水20 mL超声处理30 min，滤过，滤液加盐酸3滴，同法制成对照药材溶液。
2.2.3 对照品溶液的制备 取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品（批号：111814-201102，中国食品药品生物制品研究院）加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.4 阴性对照溶液制备 取阴性对照0.1 g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.2 薄层色谱试验 照 2015 年版中国药典四部薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液5～10 μL、对照药材溶液、对照品溶液各2 μL、阴性对照溶液5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓水（6∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，日光下检视。如图1所示。
2.3 结果 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，13批不显相同颜色的斑点，5批显相同颜色的斑点。
3 讨论
3.1 试验结果 本试验采用薄层色谱检查方法检查金银花配方颗粒中以山银花代替金银花投料，或在金银花中掺如山银花投料。结果能有效地检出阳性样品，以作为金银花配方颗粒检查山银花的方法。18批样品检出5批阳性样品，对金银花配方颗粒中以山银花代替投料、在金银花中掺入山银花投料都能很好的檢验出来。
3.2 方法应用 薄层检查方法在微量掺杂方面可能因量的问题无法检出，但该方法在常规掺杂方面仍然可有效应用。灰毡毛忍冬皂苷乙可以作为区分金银花与山银花的指标成分，在金银花中不存在该成分，为山银花的有效成分，检测该成分可以鉴别金银花与山银花。
3.3 其他补充方向 掺杂检测方法除了薄层色谱，还可以建立高效液相色谱法，甚至质谱-色谱联用等方法补充验证，相互补充，提高方法准确度。
参考文献
[1]邹冬兰， 陈伟兰， 曹宝华.金银花及山银花的鉴别[J]. 神州药房，2009（11）：773.
[2]成差群，谭秀芬，钟碧莲.金银花和山银花的鉴别与归属[J].中国地方病防治杂志， 2017，32（6）：686-687.
[3]国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010 年版第一增补本[M]. 北京： 中国医药科技出版社，2010：79-80.
[4]肖宏华，甄诚，刘开玉. 薄层色谱法鉴别双黄连口服液中金银花成分的改进[J]. 首都医药，2013，20（24）：71-72.
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[6]何远景.复方双花颗粒中金银花的定性鉴别标准提高研究[J].四川中医 ，2017，35（1）：53-56.
（收稿日期：2021-02-09 编辑：刘斌）