【摘 要】
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本试验旨在构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因重组表达载体,并建立稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系.利用RT-PCR方法扩增Asia 1型FMDV的cDNA,获得VP2基因完整的编码区,构
【机 构】
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哈尔滨医科大学基础医学院,山东省农业科学院奶牛研究中心,秦皇岛市卫生学校,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
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本试验旨在构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因重组表达载体,并建立稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系.利用RT-PCR方法扩增Asia 1型FMDV的cDNA,获得VP2基因完整的编码区,构建可表达VP2的带有绿色荧光蛋白标记基因的pIRES2-EGFP-VP2重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofeetamineTM 2000将重组质粒转染293T细胞,通过Western Blot技术检测VP2蛋白的瞬时表达;然后再转染BHK-21细胞,通过G418筛选,形成单克隆细胞系,经荧光筛选到表达EGFP的抗性单克隆细胞,扩繁培养克隆细胞.再通过Western Blot技术检测其VP2的表达,最终筛选到稳定表达FMDV VP2基因的BHK-21细胞系.结果表明,VP2基因重组表达载体pIRES2-EGFP-VP2构建正确,能够在293T细胞内瞬时表达;转染BHK-21细胞,经G418筛选到表达VP2基因的BHK-21细胞克隆,经长达60 d的传代,获得了稳定表达VP2基因和EGFP的BHK-21细胞系.上述结果表明,我们建立了稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系,为进一步探讨VP2基因在FMDV诱导细胞凋亡中的作用奠定基础.
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