白头翁皂苷B4、粉防己碱对奥沙利铂耐药的结肠癌细胞的耐药逆转作用及其机制

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背景与目的:奥沙利铂(oraliplatin,L-OHP)是结直肠癌最常用的化疗药物之一,但临床上常见结直肠癌L-OHP化疗耐药。本研究旨在探讨中药单体白头翁皂苷B4(anemoside B4,AB4)以及粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对人结肠癌L-OHP耐药细胞Lo Vo/L-OHP耐药的逆转作用,并初步研究其机制。方法:采用浓度梯度实验筛选无毒剂量的AB4、Tet,无毒剂量的AB4、Tet作用于Lo Vo/L-OHP细胞48 h后,检测Lo Vo/L-OHP细胞对L-OHP耐药的变化,检测处理后细胞凋亡、细胞周期变化情况,通过RT-PCR及Western blot检测相关基因P-gp、z DHHC9和SMAD4的m RNA及蛋白的表达水平。结果:AB4及Tet作用48 h后对Lo Vo/L-OHP细胞的5%抑制率浓度分别为0.71及0.45μg/m L,以此作为无毒剂量。L-OHP对Lo Vo/L-OHP细胞IC50为(112.5±23.6)μg/m L,分别加入0.71μg/m L AB4及0.45μg/m L Tet后,L-OHP对Lo Vo/L-OHP细胞的IC50值分别为(62.8±21.4)及(58.9±26.3)μg/m L,IC50值均显著下降(P值均<0.05)。细胞周期检测发现,AB4及Tet处理后G1期细胞略有减少,S期细胞略有增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。细胞凋亡检测发现AB4及Tet处理后凋亡率略有上升,但差异均无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测显示耐药细胞相对于亲本细胞,P-gp及z DHHC9基因表达升高,SMAD4表达降低(P值均<0.05),经过AB4处理后,耐药细胞P-gp基因表达下降。Western blot检测相关蛋白水平后发现,耐药细胞经过AB4处理后,P-gp蛋白表达下降,经过Tet处理后z DHHC9蛋白表达下调。结论:AB4及Tet能逆转Lo Vo/L-OHP耐药细胞对L-OHP的耐药,AB4逆转机制可能与降低P-gp表达有关,Tet逆转机制与降低z DHHC9表达水平有关。
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