DiI体外标记的大鼠骨髓间充质干细胞与乳鼠心肌细胞接触共培养诱导分化为心肌样细胞的实验研究

来源 :中国分子心脏病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tszhzhc159
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目的 对DiI标记的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞(CMs)进行接触共培养,观察接触共培养对DiI标记的干细胞向CMs分化的影响,对其内在机制进行初步探究.在细胞标记下,为干细胞治疗心肌梗死寻找一种合适的诱导分化方法.方法 分离培养获得SD大鼠BMSCs,流式细胞鉴定表面标志物.分离获得乳鼠CMs.BMSCs培养至3代后,使用DiI染料对BMSCs进行标记.将DiI标记的BMSCs与CMs接触共培养,并设仅有DiI标记的BMSCs为对照组,24 h后在显微镜下观察细胞生长情况.在共培养7日后,使用心肌标志物(cTnT、α-actin)对细胞进行免疫荧光染色,在荧光显微镜下观察干细胞的分化情况.在共培养的第1、7日使用流式分析BMSCs向CMs的定向分化效率.使用钙黄绿素对CMs染色,观察接触共培养细胞间染料转移;使用缝隙连接蛋白43(Cx43)对细胞进行免疫荧光染色,观察缝隙连接与接触共培养之间存在的关系.结果 BMSCs流式细胞术鉴定:CD90、CD44H强阳性,CD11b/c、CD45阴性.共培养24 h后显微镜下观察可见:细胞贴壁,荧光激发时DiI标记的BMSCs发红光,未标记的CMs不发光.第7日,部分DiI标记的BMSCs表达cTnT、α-actin.流式分析显示:实验组第7日干细胞分化率高于对照组(20.06%:2.45%,P<0.05).另外,共培养第2日起,部分BMSCs免疫荧光Cx43染色阳性;并且共培养第1日钙黄绿素在CMs中显示绿色荧光,共培养第3日起部分BMSCs显示绿色荧光.结论 DiI标记的BMSCs在与CMs接触共培养下可被诱导分化为心肌样细胞,并且接触共培养促进其分化为心肌样细胞,可能与通过缝隙连接传递相关信号通路有关.
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