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目的 构建真核表达载体pDsRed-Monomer-N1-开放读码框(ORF)3,并在BHK-21细胞观察ORF3的表达及定位. 方法 用RT-PCR扩增HEV ORF3基因,用Hind Ⅲ/EcoR Ⅰ酶切ORF3基因及pDsRed-Monomer-N1载体,并构建成重组真核表达载体pDsRed-Monomer-N1-ORF3,将鉴定为阳性的质粒经脂质体转染BHK-21细胞,用RT-PCR检测ORF3基因的过表达,用Wsternblot和免疫组织化学法检测ORF3的表达及定位.结果 pDsRed-Monomer-N1-ORF3重组质粒构建成功,转染BHK-21细胞后ORF3基因正常转录,免疫组织化学结果显示ORF3主要分布在BHK-21细胞的细胞质中,ORF3能与特异性抗体结合.结论 在BHK-21中表达的融合蛋白主要定位于细胞质中,为进一步研究该蛋白的生理功能奠定了基础。