【摘 要】
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为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价.结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5％脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1:20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1:5000,3
【机 构】
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贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025;贵州省动物疫病预防控制中心,贵州贵阳 550008;贵州农业职业学院,贵州清镇 551400;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025;贵州省动物生物
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为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价.结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5％脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1:20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1:5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min.该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1:320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10％.以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45％.这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段.
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