【摘 要】
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前期研究发现,人基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)在唐氏综合征(Down’s syndrome,DS)胎儿脑组织内表达下调.为了探讨TIMP-1
【机 构】
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北京大学人民医院儿科,北京大学人民医院临床分子生物学研究所,北京大学人民医院生殖医学中心,
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前期研究发现,人基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)在唐氏综合征(Down’s syndrome,DS)胎儿脑组织内表达下调.为了探讨TIMP-1表达下调参与DS脑病变发生的可能机制,本研究以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)为模型,观察TIMP-1基因沉默后对其增殖和凋亡的影响.应用LipofectaminTM2000将TIMP-1特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)导入SH-SY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达TIMP-1-shRNA细胞株;应用RT-PCR、real-time PCR和Western印迹对干扰效率进行鉴定:与SH-SY5Y细胞相比,无论在mRNA水平还是蛋白水平,SH-SY5Y-TIMP-1-shRNA细胞中TIMP-1的表达显著下调(下调率接近100%).结果显示,已成功构建了TIMP-1基因沉默的SH-SY5Y细胞模型.在此基础上,通过MTT检测发现,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞增殖减慢;流式细胞仪和荧光显微镜凋亡检测显示,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞凋亡明显增加.这些研究结果表明,TIMP-1基因沉默能削弱SH-SY5Y细胞的增殖能力并增强SH-SY5Y的凋亡效应,提示TIMP-1可能是通过影响神经细胞的增殖和凋亡参与DS智力低下的发病过程.
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