【摘 要】
：
目的 构建人颗粒溶素(GNLY)质粒,进行原核表达,纯化得到相对分子质量9 000目的 片段,免疫新西兰大白兔得到兔抗GNLY多克隆抗体.方法分离外周血单个核细胞,用卡介苗和白细胞介
【机 构】
：
上海第二军医大学附属长征医院实验诊断科
论文部分内容阅读
目的 构建人颗粒溶素(GNLY)质粒,进行原核表达,纯化得到相对分子质量9 000目的 片段,免疫新西兰大白兔得到兔抗GNLY多克隆抗体.方法分离外周血单个核细胞,用卡介苗和白细胞介素-2(IL-2)刺激,培养12 d.抽提细胞RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得含有222 bp的GNLY cDNA,克隆到pMD18-T载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+)中,得到重组质粒pET28a(+)-GNLY并将其转化大肠杆菌,诱导表达后用镍(Ni)亲和层析纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blot)进行鉴定.用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,得到抗-GNLY特异性多抗.结果成功构建了pET28a(+)-GNLY表达质粒.用大肠杆菌表达带6个组氨酸的融合蛋白并进行纯化,最后免疫兔得到抗-GNLY特异性多抗,并经Western blot验证正确.结论获得了纯化的GNLY蛋白和抗-GNLY多抗血清,为今后对疾病中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞活性的研究打下了基础.
其他文献
RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将RA538基因成功地转导到人肺腺癌细胞系 (GLC - 82 )中 ,经X -gal染色证实
脑分水岭梗塞是指脑的任意２条动脉分布区交界处的脑梗塞。现将我院２年来经ＣＴ或（和）ＭＲＩ证实的１６例报告如下。１ 临床资料１．１ 一般资料：男性１１例，女性５例；年龄４６～７６岁。睡眠时发病７例，休息时发病１例，活动时发
目的:探讨不同分娩方式与早发型母乳性黄疸发病率的关系及和胃动素(MOT)、胃泌素(GAS)水平的相关性。方法:由专人对该院产科出生正常的新生儿218例进行监测,其中剖宫产136例,
通过对不同人群组 75 8例肝癌特异蛋白 (Serum Hepatits Cancer SpecialProtein,SHCSP)检测结果 ;原发性肝癌 SHCSP阳性检出率 89.11% ,高于 AFP检出率 71.2 1% ,统计学处理
目的 进一步观察卡托普利抗心肌纤维化的作用及其可能机制。方法 建立腹主动脉狭窄所致充血性心力衰竭心肌肥厚大鼠模型，观察左室质量指数（ｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｍａｓｓｉｎｄｅｘ，ＬＶＭＩ）；采用免疫组织化学染色方法观察心肌
为探讨微血管密度 (MVD)及血管内皮生长因子 (VEGF)的表达与鼻咽癌 (NPC)侵袭转移关系 ,在分子水平干预肿瘤血管生成 ,预防 NPC复发和转移打下基础 ,采用免疫组织化学 S- P法
目的 探讨巩膜隧道切口行儿童白内障摘除人工晶体植入术的效果及优点。方法 分别行角巩膜缘梯形切口和巩膜隧道切口 ,对 4 6例 ( 59眼 )儿童外伤性白内障、先天性白内障行
阐述了在纺织新产品设计中即要打出高水平,又要兼顾企业利润、市场需求.同时指出,做一个合格的设计人员,即要会产品设计,也要懂质量、营销等多方面知识.文章提出了新产品设计
家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)是一种常染色体显性遗传性肿瘤,发病率约为1/7000,占结直肠癌的1%左右[1].随着检测技术的提高,FAP的发病率呈上升趋
人类白细胞抗原 (HLA) DQB1基因是 1型糖尿病的主要遗传易感位点。在T细胞发育成熟、自身反应T细胞株增殖、活化和免疫调节过程中 ,DQ分子结构特征构成了自身免疫反应激活的