【摘 要】
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目的观察三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合生物支架中大鼠神经干细胞(NSCs)生长和分化情况。方法取妊娠14～16 d的SD大鼠胚胎大脑皮质，分离培养和鉴定大鼠NSCs。采用低温三维打印联合冷冻干燥技术制备胶原蛋白-壳聚糖复合生物支架，将NSCs移植入三维支架共培养，并将常规悬浮培养NSCs为对照组(3组，每组5个复孔)，三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架共培养的NSCs为观察组(3组，每组5个复孔)，使
【机 构】
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300162 天津， 武装警察部队后勤学院附属医院脑科中心 武装警察部队脑创伤与神经疾病研究所 天津市神经创伤修复重点实验室,300162 天津， 武装警察部队后勤学院附属医院脑科中心 武装警察部队脑
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目的观察三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合生物支架中大鼠神经干细胞(NSCs)生长和分化情况。
方法取妊娠14～16 d的SD大鼠胚胎大脑皮质，分离培养和鉴定大鼠NSCs。采用低温三维打印联合冷冻干燥技术制备胶原蛋白-壳聚糖复合生物支架，将NSCs移植入三维支架共培养，并将常规悬浮培养NSCs为对照组(3组，每组5个复孔)，三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架共培养的NSCs为观察组(3组，每组5个复孔)，使用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上的生长状况。分别采用细胞计数试剂盒和免疫荧光法检测NSCs的吸光度值和分化情况。
结果NSCs培养第3代神经球中免疫荧光检测提示Nestin蛋白表达阳性，诱导7 d后NSCs的免疫荧光检测提示神经元特异性核蛋白(NeuN)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性。三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架为三维多孔立体结构，四边形孔径为(510±63)μm。显微镜及扫描电镜观察结果显示NSCs可在支架中很好地生长、分化。观察组共培养1、4、7、11、14 d吸光度值均高于对照组[(0.34±0.04)比(0.21±0.03)、(0.70±0.08)比(0.35±0.04)、(0.92±0.11)比(0.67±0.08)、(0.75±0.09)比(0.42±0.05)、(0.53±0.07)比(0.27±0.03)]，差异均有统计学意义(均P<0.05)。三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架周围和内部存在NeuN和GFAP阳性细胞。
结论三维打印技术可制备微观结构可控的胶原蛋白-壳聚糖复合支架，且具有良好的生物相容性，适宜NSCs生长和分化。
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