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摘要：通过不同的抗凝剂对实验影响，加强学生对实验每一环节的重视，同时通过实验对比来提高学生对实验的兴趣，从而达到实验教学目的：精细、严谨。以枸橼酸钠与肝素分别制备血浆，对教材中《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的实验影响来提高学生对抗凝剂的重视为例。
关键词：血浆 抗凝剂 枸橼酸钠 肝素
抗凝剂的问题是在《自拟中药方剂对实验性动脉硬化及血栓治疗作用研究》科研中测定生化指标时遇到的。用不同抗凝剂制备血浆对本科研中的生化指标测定是有影响的，就此问题翻阅了教材，查阅了有关资料，从而保证了在抗凝剂这一环节不会出现差错。
从科研中联想到我们实验教学，在《生化检验技术》的教学中，对学生在实验课时被测物用的是血浆还是血清，用不同抗凝剂的血浆，对本次实验有何种影响，不太重视。平时血浆制备都是按教材规定操作的。为了加强学生对实验每一个环节的重视，以枸橼酸钠与肝素分别制备血浆，对教材中《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的实验有明显影响，来提高学生对抗凝剂的重视。从而树立学生对实验的严谨态度。本次实验，要求从加入不同种和不同量的抗凝剂制备的血浆开始，一直到测定吸收光度计算纤维蛋白含量，都让学生亲自动手，从而使学生对不同抗凝剂制备血浆对生化实验的影响有深刻认识，在以后工作中不会因抗凝劑出现差错。
一、实验目的
验证抗凝剂枸橼酸钠与肝素分别制备的血浆对实验《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的影响。
二、实验原理
于稀释的两种血浆中分别加入钙离子，在使纤维蛋白原转化纤维蛋白使其凝聚形成絮状物的试管中，吸入双缩脲试剂来测定纤维蛋白含量，从而验证哪种抗凝剂适合此实验。
三、实验试剂
225.2mmol/l氯化钙溶液、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白标准液。
枸橼酸钠抗凝剂制备的血浆（B1）、肝素钠制备的血浆（B2）。
四、实验器材
一次性试管1.5×10cm、小玻璃棒、0.5ml、5ml刻度吸管、微量加液器
五、实验步骤
1.表1
2.将上述试管1中的絮状物用小玻璃棒卷起，并轻轻转动玻璃棒，在试管壁上轻轻挤压，这样絮状物裹在玻璃棒上，用滤纸小心吸干絮状物上液体。
3.取一支试管（测定管），加入生理盐水0.1ml，双缩脲试剂5ml，然后，把裹着絮状物的小玻璃棒放入其中，置37℃水浴中不断搅动玻棒，直到纤维蛋白絮状物完全溶解。此时不要着急，如果絮状物没有完全溶解会影响测定的含量。
4.取两支试管（标准管），加入10倍稀释的蛋白标准液0.1ml（生理盐水：蛋白标准液体积比为9︰1），双缩脲试剂5ml。
5.取第三支试管（空白管），加入蒸馏水0.1ml，双缩脲试剂5ml，见表2。
6.将以上3支试管混匀后，置37℃水浴10分钟，然后取出，用540nm波长，以空白管调“0”，读出吸光度A（标）、A（测）。
7.根据公式计算含量
复钙双缩脲法测定血浆蛋白的含量这种方法无疑义，但我们应该看到本次实验用到的是血浆，提到血浆就应该考虑到抗凝剂。从实验步骤1可以看到一次性试管1与一次性试管2的结果，如果预先不认真做预习，按照一次性试管2的结果，以下实验操作无法进行。从而可以看到不同抗凝剂制备的血浆对生化实验的重要性。分析原因：
首先，对抗凝过程做简单概述：凝血酶原激活物的形成（Xa、V、Ca2+和PF3复合物）促使凝血酶原形成（血浆中无活性的因子Ⅱ被激活为有活性的因子Ⅱ）促使纤维蛋白的形成（絮状物）。
其次，枸橼酸的抗凝过程：枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物，钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中钙离子减少，使血液凝固受阻。而肝素钠的抗凝过程：肝素钠是一种含有硫酸根的粘多糖，带强大的负电荷，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活霉的形成；阻止凝血酶原变成凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。《临床检验学》教材中可以查到。了解两种抗凝剂的作用机理，我们就不难分析上述实验结果的不同。枸橼酸钠抑制凝血过程中的钙离子，如果在体外环境中加入适量的钙离子，那么凝血过程又被激活，最终有纤维蛋白絮状物形成。肝素钠抗凝是抑制凝血因子阻碍凝血酶的形成，即使加入钙离子，抗凝过程也不会被激活。从而也就不会有纤维蛋白絮状物形成。
上述生化实验过程虽简单明了，但是在实验前学生应有充分的预习，这是学生应养成的良好习惯。抗凝剂的知识在《临床检验学》中已学习过，那么就应该使知识相互贯通。培养学生对待实验不仅要有严谨的态度，而且还要有科学理论做根基。“授人以鱼不如授人以渔”，这是我们当代教师应该遵循的教育理念。
参考文献：
[1]沈岳奋.生物化学检验技术.
[2]赵桂芝.临床检验.
关键词：血浆 抗凝剂 枸橼酸钠 肝素
抗凝剂的问题是在《自拟中药方剂对实验性动脉硬化及血栓治疗作用研究》科研中测定生化指标时遇到的。用不同抗凝剂制备血浆对本科研中的生化指标测定是有影响的，就此问题翻阅了教材，查阅了有关资料，从而保证了在抗凝剂这一环节不会出现差错。
从科研中联想到我们实验教学，在《生化检验技术》的教学中，对学生在实验课时被测物用的是血浆还是血清，用不同抗凝剂的血浆，对本次实验有何种影响，不太重视。平时血浆制备都是按教材规定操作的。为了加强学生对实验每一个环节的重视，以枸橼酸钠与肝素分别制备血浆，对教材中《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的实验有明显影响，来提高学生对抗凝剂的重视。从而树立学生对实验的严谨态度。本次实验，要求从加入不同种和不同量的抗凝剂制备的血浆开始，一直到测定吸收光度计算纤维蛋白含量，都让学生亲自动手，从而使学生对不同抗凝剂制备血浆对生化实验的影响有深刻认识，在以后工作中不会因抗凝劑出现差错。
一、实验目的
验证抗凝剂枸橼酸钠与肝素分别制备的血浆对实验《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的影响。
二、实验原理
于稀释的两种血浆中分别加入钙离子，在使纤维蛋白原转化纤维蛋白使其凝聚形成絮状物的试管中，吸入双缩脲试剂来测定纤维蛋白含量，从而验证哪种抗凝剂适合此实验。
三、实验试剂
225.2mmol/l氯化钙溶液、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白标准液。
枸橼酸钠抗凝剂制备的血浆（B1）、肝素钠制备的血浆（B2）。
四、实验器材
一次性试管1.5×10cm、小玻璃棒、0.5ml、5ml刻度吸管、微量加液器
五、实验步骤
1.表1
2.将上述试管1中的絮状物用小玻璃棒卷起，并轻轻转动玻璃棒，在试管壁上轻轻挤压，这样絮状物裹在玻璃棒上，用滤纸小心吸干絮状物上液体。
3.取一支试管（测定管），加入生理盐水0.1ml，双缩脲试剂5ml，然后，把裹着絮状物的小玻璃棒放入其中，置37℃水浴中不断搅动玻棒，直到纤维蛋白絮状物完全溶解。此时不要着急，如果絮状物没有完全溶解会影响测定的含量。
4.取两支试管（标准管），加入10倍稀释的蛋白标准液0.1ml（生理盐水：蛋白标准液体积比为9︰1），双缩脲试剂5ml。
5.取第三支试管（空白管），加入蒸馏水0.1ml，双缩脲试剂5ml，见表2。
6.将以上3支试管混匀后，置37℃水浴10分钟，然后取出，用540nm波长，以空白管调“0”，读出吸光度A（标）、A（测）。
7.根据公式计算含量
复钙双缩脲法测定血浆蛋白的含量这种方法无疑义，但我们应该看到本次实验用到的是血浆，提到血浆就应该考虑到抗凝剂。从实验步骤1可以看到一次性试管1与一次性试管2的结果，如果预先不认真做预习，按照一次性试管2的结果，以下实验操作无法进行。从而可以看到不同抗凝剂制备的血浆对生化实验的重要性。分析原因：
首先，对抗凝过程做简单概述：凝血酶原激活物的形成（Xa、V、Ca2+和PF3复合物）促使凝血酶原形成（血浆中无活性的因子Ⅱ被激活为有活性的因子Ⅱ）促使纤维蛋白的形成（絮状物）。
其次，枸橼酸的抗凝过程：枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物，钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中钙离子减少，使血液凝固受阻。而肝素钠的抗凝过程：肝素钠是一种含有硫酸根的粘多糖，带强大的负电荷，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活霉的形成；阻止凝血酶原变成凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。《临床检验学》教材中可以查到。了解两种抗凝剂的作用机理，我们就不难分析上述实验结果的不同。枸橼酸钠抑制凝血过程中的钙离子，如果在体外环境中加入适量的钙离子，那么凝血过程又被激活，最终有纤维蛋白絮状物形成。肝素钠抗凝是抑制凝血因子阻碍凝血酶的形成，即使加入钙离子，抗凝过程也不会被激活。从而也就不会有纤维蛋白絮状物形成。
上述生化实验过程虽简单明了，但是在实验前学生应有充分的预习，这是学生应养成的良好习惯。抗凝剂的知识在《临床检验学》中已学习过，那么就应该使知识相互贯通。培养学生对待实验不仅要有严谨的态度，而且还要有科学理论做根基。“授人以鱼不如授人以渔”，这是我们当代教师应该遵循的教育理念。
参考文献：
[1]沈岳奋.生物化学检验技术.
[2]赵桂芝.临床检验.