背景:虽然聚合酶链反应方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速的特点,但同时也发现用聚合酶链反应技术进行生物化学实验和医学检验时,经常会出现假阴性的现象。目的:探讨聚合酶链反应变性温度与产物假阴性关系。设计、时间及地点:观察实验,于2008-03在吉林大学第二医院中心实验室完成。材料:重组质粒pUC-19(含有HBV完整基因组)和大肠杆菌JM109由吉林大学第二医院中心实验室提供。质粒DNA小量抽提试剂盒购自爱思进AXYGEN生物技术(杭州)公司。方法:以含有HBV完整基因组的重组质粒pUC-19为模板进行聚合酶链反应扩增,人为改变聚合酶链反应循环变性温度,观察其对聚合酶链反应扩增结果的影响。主要观察指标:以不加模板的反应体系为阴性对照,以加2倍于正常反应体系的模板反应体系为阳性对照,肉眼在紫外灯下观察不到产物判为阴性。结果:随着变性温度的降低,聚合酶链反应扩增效率降低,产物量明显减少。当变性温度低至85℃及85℃以下,琼脂糖凝胶电泳肉眼观察不到扩增产物。结论:较低的变性温度可导致扩增效率降低甚至假阴性的结果。