【摘 要】
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根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接
【机 构】
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新疆农业大学农学院; 新疆农业大学农业生物技术重点实验室;
【基金项目】
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国家转基因重大专项(2011ZX0800500500—008)
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根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的质粒并与pBI121-bar重组,重组质粒命名为pBI121-bar/Bt。重组质粒导入农杆菌LBA4404工程菌中,转化新海24号棉花胚性愈伤组织。PPT抗性实验证明,构建的pBI121-bar/Bt载体获得抗除草剂抗性,并筛选出PPT临界筛选浓度为3.0mg/L。
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