【摘 要】
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利用PCR技术,从含非洲猪瘟(ASFV)P72基因的克隆质粒BBBBPr4中扩增出1.94 kb的P72基因.将P72基因和表达载体pET-30c(+)分别用限制性核酸内切酶Fba Ⅰ/XHo Ⅰ和BamH Ⅰ/XHo Ⅰ
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利用PCR技术,从含非洲猪瘟(ASFV)P72基因的克隆质粒BBBBPr4中扩增出1.94 kb的P72基因.将P72基因和表达载体pET-30c(+)分别用限制性核酸内切酶Fba Ⅰ/XHo Ⅰ和BamH Ⅰ/XHo Ⅰ进行双酶切,然后在T4 DNA连接酶作用下,将P72基因定向克隆至载体pET-30c(+)中相应位点上,并转化至宿主菌BL21(DE3)中,得到了重组菌株BL21(DE3)(pET-ASFVP72).经PCR鉴定,构建的重组菌株中含有P72基因.重组菌株BL21(DE3)(pET-ASFVP72)经IPTG诱导后,其表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明衣壳蛋白P72基因可以在受体菌中高效表达,达到了菌体总蛋白的34%,表达产物的分子量约为78 Ku,并能被ASFV抗体所识别.
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