【摘 要】
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目的 检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)并克隆表达其E7基因。方法采用GP5 +/GP6 +引物系统扩增 5 8例宫颈癌组织 ,将荧光偏振 (FP)检测技术与模板指导的末端延
【机 构】
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西安交通大学第二医院妇产科,第四军医大学全军基因诊断技术研究所,第四军医大学全军基因诊断技术研究所,西安交通大学医学院组织胚胎学教研室,西安交通大学第二医院妇产科,西安交通大学第二医院妇产科,第四军医
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目的 检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)并克隆表达其E7基因。方法采用GP5 +/GP6 +引物系统扩增 5 8例宫颈癌组织 ,将荧光偏振 (FP)检测技术与模板指导的末端延伸反应 (TDI FP)结合 ,检测HPV5 8,确定HPV5 8感染阳性宫颈癌组织。用特异引物从HPV5 8阳性标本中扩增HPV5 8早期表达蛋白E7基因 ,将其连入pGEM TEasy载体 ,获得克隆重组体HPV5 8E7 pGEM T ,并测序验证。将E7基因与pRSET A融合表达载体连接 ,获得E7表达重组体pRSET 5 8E7,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达。结果 5 8例宫颈癌标本中 ,HPV5 8阳性 10例 ,占 5 2例HPV阳性标本的 19.2 %。从其中扩增到了HPV5 8E7基因并构建了其克隆和表达重组体。其表达重组体经IPTG诱导后 ,可表达Mr16× 10 3 的HPV5 8E7His6融合蛋白 ,表达量占菌体蛋白的 30 %。结论 欧美国家少见的高危HPV5 8在中国陕西人宫颈癌组织中并不少见。HPV5 8E7重组表达体可在大肠杆菌中高效表达 ,为HPV5 8相关肿瘤诊断试剂及疫苗的研制奠定了初步基础
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