【摘 要】
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按金黄色葡萄球菌多重耐药转运蛋白NorA的编码序列设计引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增出norA基因中1155 bp cDNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到感受态
【机 构】
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吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳,100161;
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按金黄色葡萄球菌多重耐药转运蛋白NorA的编码序列设计引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增出norA基因中1155 bp cDNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到感受态大肠杆菌JM109中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道一致.从阳性克隆中提取质粒,经NdeⅠ和XhoⅠ酶切,回收1155 bp目的片段,定向克隆到pET-28a(+)表达载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,再次转化到BL21(DE3)中,成功地筛选到阳性克隆.经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出norA基因的表达.
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