【摘 要】
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为建立大熊猫犬瘟热血清抗体间接ELISA检测方法,用合成的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)H和F短肽作为包被抗原,分别以HRP标记的鼠抗大熊猫IgG Fc二抗、HRP标记兔抗
【机 构】
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秦岭大熊猫研究中心珍稀野生动物救护基地,陕西周至710402;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100
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为建立大熊猫犬瘟热血清抗体间接ELISA检测方法,用合成的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)H和F短肽作为包被抗原,分别以HRP标记的鼠抗大熊猫IgG Fc二抗、HRP标记兔抗犬IgG二抗、HRP标记SPA作为检测二抗,通过矩阵法优化抗原包被浓度、血清稀释度和酶标二抗稀释度,评估3种方法的符合率、敏感性和重复性,建立3种大熊猫犬瘟热血清抗体ELISA检测方法,并用该方法检测大熊猫2次免疫犬瘟热疫苗的血清抗体.结果 显示,抗原最佳包被质量浓度为25 mg/L,血清最佳稀释度为1∶100,3种二抗的最佳稀释度分别1∶1000,1∶1000,1∶500,3种方法的符合率分别为100％,92％,100％,敏感性分别为1∶400,1∶100,1∶100,3种方法的重复性较好,批内和批间变异系数均小于10％.对大熊猫血清抗体的检测结果表明,所有血清样本的抗体效价均大于1∶100,50％的血清样本抗体水平相较一免有了显著升高.本研究对3种用于大熊猫犬瘟热血清抗体检测二抗进行评估,为大熊猫犬瘟热ELISA试剂盒的开发、流行病学监测以及疫苗免疫效力的评估提供支撑.
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