【摘 要】
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目的 建立人真皮来源淋巴管内皮细胞(LECs)分离和培养的方法.方法 采用中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠从真皮组织分选CD34-/CD31+细胞.免疫细胞化学、免疫荧光及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LECs特异标志的表达,噻唑蓝(MTT)比色试验测定多种与内皮细胞增殖相关的细胞因子和低氧条件对其增殖的影响.结果 CD34-/CD31+细胞在单层细胞培养时形成内皮细胞典型的铺
【机 构】
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200011,上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科,200011,上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科,200011,上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科
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目的 建立人真皮来源淋巴管内皮细胞(LECs)分离和培养的方法.方法 采用中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠从真皮组织分选CD34-/CD31+细胞.免疫细胞化学、免疫荧光及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LECs特异标志的表达,噻唑蓝(MTT)比色试验测定多种与内皮细胞增殖相关的细胞因子和低氧条件对其增殖的影响.结果 CD34-/CD31+细胞在单层细胞培养时形成内皮细胞典型的铺路石样外观,而在胶原凝胶三维培养时形成管状结构.CD34-/CD31+细胞表达淋巴管内皮细胞特异性标志,包括LYVE-1,VEGFR-3和Prox-1.RT-PCR显示Prox1和VEGFR-3 mRNA在CD34-/CD31+细胞中特异性表达.特异作用于淋巴管内皮细胞的VEGF-C对LECs的促增殖作用明显(P＜0.01).低氧条件和Ang2在体外未显示对LECs有促进增殖的作用.结论 应用中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠分选可以成功分离获取人真皮LECs。
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