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[摘 要]目的：探讨液相色谱检定甜蜜素应注意的事项。方法：选择三种甜味食谱进行色谱检定甜蜜素，色谱条件：C18色谱柱，柱温25℃，流动相为甲醇：5mmol/L Tris缓冲溶液（pH6.5，5：95，V/V），流速为1.2mL/min，检测波长215nm。结果：检定的变异系数均小于2%，A、B、C甜味样品中的甜蜜素含量分别为5.236、0.153、0.163和mg/g。结论：液相色谱检定甜蜜素含量方法快速、简便等特点，在甜味食品检验中具有实际应用价值。
[关键词]液相色谱；甜蜜素；甜味食品；食品检验
中图分类号：TS275.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）42-0167-01
甜蜜素的化学名称为环己基氨基磺酸钠，是食品生产中常用的添加剂【1】。甜蜜素可广泛用于调味品、果酱、果冻、冰淇淋、糕点、蜜饯、饮料等食品，同时还可以与其它甜味剂混合使用【2】。由于它们大多是用人工合成方法制造的，过量使用可能有损健康，所以消费者对使用甜味剂产品的安全性有所顾虑。目前国家标准中规定测定食品中甜蜜素的方法主要有比色法、气相色谱法、薄层色谱法等【3】。本文具体探讨了液相色谱检定甜蜜素的效果与应注意的事项，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
LC-1OATvp液相色谱仪（日本岛津），WH-1微型旋涡振荡器（上海沪西分析仪器），N2010色谱工作站（中国科学院）；除甲醇为色谱纯外，其余均为分析纯试剂；标准品甜蜜素（纯度>99.9%）来自生物样品中心。
1.2 标准溶液制备
称取标准品甜蜜素0.1000g，用超纯水溶解稀释至10mL，于-20℃冰箱保存。然后用超纯水逐级稀释，配成甜蜜素浓度为1.0mg/mL的标准使用液。
1.3 色谱实验条件
C18色谱柱，柱温25℃，流动相为甲醇：5mmol/L Tris缓冲溶液（pH6.5，5：95，V/V），流速为1.2mL/min，检测波长215nm
1.4 样本处理
直接吸取适量的甜味食物液体样品，用5mL蒸馏水浸泡4小时，将浸泡液移入密封平衡瓶内，从加蒸馏水补足体积至10mL开始。然后全部用以下标准操作方法：分别移取甜蜜素标准溶液（1.000mg/mL）1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于25 mL密封顶空瓶中，加蒸馏水补足体积至10.0 mL，再分别加入1.0 m1.10%的硫酸溶液、1.00mL10%的亚硝酸钠溶液，加盖密封后室温放置30 min，并间歇振摇。
2 结果
2.1 精密度和回收率
（1）精密度：取1.00mL的甜蜜素标准溶液5份，按照测定方法在最优实验条件下分别进行测定，结果见表1，变异系数为1.02%，其值非常瘦。（2）回收率：选择A、B、C三种甜味样品，每一种样品都分别加入50、100、200μg的甜蜜素标准溶液，加标本回收率结果见表2，回收率都在100.0%左右，有很好的回收效果。
2.3 样品测定
在上述最优条件下，采用本方法对不同样品进行测定，A、B、C甜味样品中的甜蜜素含量分别为5.236、0.153、0.163和mg/g。
3 讨论
甜味剂是一类能赋予食品甜味的食品添加剂，按其来源可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂。其优点是甜度纯正、风味自然，在食品加工中具有较好的稳定性，可以代替蔗糖或与蔗糖混合使用，能高度保持食品原有的风味，并能延长食品的保存时间【4】。当前我国经全国食品添加剂标准化技术委员会审定，由卫生部批准实施的食品添加剂使用卫生标准GB2760中允许使用的人工合成甜味剂共计7种，甜蜜素就为常见的一种【5】。
在检定甜蜜素的方法中，高效液相色谱法不受试样挥发性的限制，对于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大的有机物，原则上都可以进行分离和分析【6】。由于其较强的分离作用以及灵敏的检验能力，在同时、快速测定共存物方面显示出较大的潜力，因而，越来越受到食品分析工作者的青睐。有学者采用反相高效液相色谱法快速分离和测定食品中甜蜜素、糖精钠和苯甲酸钠，回收率在94.6-102.4%之间，相对标准偏差均小于3.9%【7】。本文对于色谱检定甜蜜素的变异系数均小于2%，回收率都在100.0%左右，A、B、C甜味样品中的甜蜜素含量分别为5.236、0.153、0.163和mg/g。
总之，液相色谱检定甜蜜素含量方法快速、简便等特点，在甜味食品检验中具有实际应用价值。
参考文献
[1] 林炳承，邹雄，韩培帧，主编.高效液相色谱在生命科学中的应用[M].山东：科学技术出版社，2008：52-54.
[2] Mark J，Rice D， Coursin B. Continuous measurement of glucose： facts and challenges[J].Anesthesiology，2012， 116（1）：67-69.
[3] 王江，刘华，薛建峰.复配甜味剂中甜蜜素含量的测定[J].中国卫生检验杂志，2011，12（3）：300-303.
[4] 肖坤，袁松.气相色谱法测定饮料中的环己基氨基磺酸钠[J].饮料工业，2009，5（2）：46-47.
[5] 张秀尧.反相高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素[J].理化检验-化学分册，2010，36（10）：451-454.
[6] 尹艳春，李志红.反相高效液相色谱法同时测定食品中的甜蜜素、糖精钠和苯甲酸钠[J].理化检验-化学分册，2009，39（8）：469-470.
[7] Shengbing Yu，Binghui Zhu，Fen Lv，et al.Rapid analysis of cyclamate in foods and beverages by gas chromatography-electron capture detector（GC-ECD）[J].Food chemistry，2012，134（4）：110-112.
[关键词]液相色谱；甜蜜素；甜味食品；食品检验
中图分类号：TS275.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）42-0167-01
甜蜜素的化学名称为环己基氨基磺酸钠，是食品生产中常用的添加剂【1】。甜蜜素可广泛用于调味品、果酱、果冻、冰淇淋、糕点、蜜饯、饮料等食品，同时还可以与其它甜味剂混合使用【2】。由于它们大多是用人工合成方法制造的，过量使用可能有损健康，所以消费者对使用甜味剂产品的安全性有所顾虑。目前国家标准中规定测定食品中甜蜜素的方法主要有比色法、气相色谱法、薄层色谱法等【3】。本文具体探讨了液相色谱检定甜蜜素的效果与应注意的事项，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
LC-1OATvp液相色谱仪（日本岛津），WH-1微型旋涡振荡器（上海沪西分析仪器），N2010色谱工作站（中国科学院）；除甲醇为色谱纯外，其余均为分析纯试剂；标准品甜蜜素（纯度>99.9%）来自生物样品中心。
1.2 标准溶液制备
称取标准品甜蜜素0.1000g，用超纯水溶解稀释至10mL，于-20℃冰箱保存。然后用超纯水逐级稀释，配成甜蜜素浓度为1.0mg/mL的标准使用液。
1.3 色谱实验条件
C18色谱柱，柱温25℃，流动相为甲醇：5mmol/L Tris缓冲溶液（pH6.5，5：95，V/V），流速为1.2mL/min，检测波长215nm
1.4 样本处理
直接吸取适量的甜味食物液体样品，用5mL蒸馏水浸泡4小时，将浸泡液移入密封平衡瓶内，从加蒸馏水补足体积至10mL开始。然后全部用以下标准操作方法：分别移取甜蜜素标准溶液（1.000mg/mL）1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于25 mL密封顶空瓶中，加蒸馏水补足体积至10.0 mL，再分别加入1.0 m1.10%的硫酸溶液、1.00mL10%的亚硝酸钠溶液，加盖密封后室温放置30 min，并间歇振摇。
2 结果
2.1 精密度和回收率
（1）精密度：取1.00mL的甜蜜素标准溶液5份，按照测定方法在最优实验条件下分别进行测定，结果见表1，变异系数为1.02%，其值非常瘦。（2）回收率：选择A、B、C三种甜味样品，每一种样品都分别加入50、100、200μg的甜蜜素标准溶液，加标本回收率结果见表2，回收率都在100.0%左右，有很好的回收效果。
2.3 样品测定
在上述最优条件下，采用本方法对不同样品进行测定，A、B、C甜味样品中的甜蜜素含量分别为5.236、0.153、0.163和mg/g。
3 讨论
甜味剂是一类能赋予食品甜味的食品添加剂，按其来源可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂。其优点是甜度纯正、风味自然，在食品加工中具有较好的稳定性，可以代替蔗糖或与蔗糖混合使用，能高度保持食品原有的风味，并能延长食品的保存时间【4】。当前我国经全国食品添加剂标准化技术委员会审定，由卫生部批准实施的食品添加剂使用卫生标准GB2760中允许使用的人工合成甜味剂共计7种，甜蜜素就为常见的一种【5】。
在检定甜蜜素的方法中，高效液相色谱法不受试样挥发性的限制，对于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大的有机物，原则上都可以进行分离和分析【6】。由于其较强的分离作用以及灵敏的检验能力，在同时、快速测定共存物方面显示出较大的潜力，因而，越来越受到食品分析工作者的青睐。有学者采用反相高效液相色谱法快速分离和测定食品中甜蜜素、糖精钠和苯甲酸钠，回收率在94.6-102.4%之间，相对标准偏差均小于3.9%【7】。本文对于色谱检定甜蜜素的变异系数均小于2%，回收率都在100.0%左右，A、B、C甜味样品中的甜蜜素含量分别为5.236、0.153、0.163和mg/g。
总之，液相色谱检定甜蜜素含量方法快速、简便等特点，在甜味食品检验中具有实际应用价值。
参考文献
[1] 林炳承，邹雄，韩培帧，主编.高效液相色谱在生命科学中的应用[M].山东：科学技术出版社，2008：52-54.
[2] Mark J，Rice D， Coursin B. Continuous measurement of glucose： facts and challenges[J].Anesthesiology，2012， 116（1）：67-69.
[3] 王江，刘华，薛建峰.复配甜味剂中甜蜜素含量的测定[J].中国卫生检验杂志，2011，12（3）：300-303.
[4] 肖坤，袁松.气相色谱法测定饮料中的环己基氨基磺酸钠[J].饮料工业，2009，5（2）：46-47.
[5] 张秀尧.反相高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素[J].理化检验-化学分册，2010，36（10）：451-454.
[6] 尹艳春，李志红.反相高效液相色谱法同时测定食品中的甜蜜素、糖精钠和苯甲酸钠[J].理化检验-化学分册，2009，39（8）：469-470.
[7] Shengbing Yu，Binghui Zhu，Fen Lv，et al.Rapid analysis of cyclamate in foods and beverages by gas chromatography-electron capture detector（GC-ECD）[J].Food chemistry，2012，134（4）：110-112.