CRISPR/Cas9体外酶切检测猪生长抑素基因定点修饰靶点活性的研究

来源 :中国畜牧兽医 | 被引量 : 0次 | 上传用户：Lassie01

【摘要】

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本试验旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法检测猪生长抑素（SST）基因定点修饰靶点的活性。试验设计5个长20bp的单链导向RNA（sgRNA）,即SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g2、SST-sgRNA-g3、SST-

【作者】

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李晓敏任红艳毕延震刘西梅郑新民吴民耀

【机构】

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陕西师范大学生命科学学院,湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

【出处】

：

中国畜牧兽医

【发表日期】

：

2016年1期

【关键词】

：

猪生长抑素基因 Cas9酶单链导向RNA(sgRNA) 体外转录

【基金项目】

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国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08010-003、2014ZX08006-003);湖北省农业科技创新中心课题(2011-620-001-003);湖北省农业科学院青年基金(2014NKYJJ02)

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本试验旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法检测猪生长抑素（SST）基因定点修饰靶点的活性。试验设计5个长20bp的单链导向RNA（sgRNA）,即SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g2、SST-sgRNA-g3、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,将寡核苷酸序列连接到可同时表达Cas9和sgRNA的质粒中,挑选正确克隆的质粒作为模板进行体外转录形成SST-sgRNA。利用CRISPR/Cas9体外酶切含靶点的DNA片段,根据酶切条带的灰度换算

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