【摘 要】
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目的:探究胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1对巨噬细胞分化的影响及机制.方法:差速离心法提取胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45和人胃黏膜细胞GES-1所分泌的外泌体(分别记为MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo和GES-1 exo),人单核细胞系TH-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,将10μg/mL的GES-1 exo、MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo以及等体积的PBS分别与M0型巨噬细胞共孵
【机 构】
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三亚市人民医院消化内二病区,海南 三亚 572100
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目的:探究胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1对巨噬细胞分化的影响及机制.方法:差速离心法提取胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45和人胃黏膜细胞GES-1所分泌的外泌体(分别记为MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo和GES-1 exo),人单核细胞系TH-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,将10μg/mL的GES-1 exo、MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo以及等体积的PBS分别与M0型巨噬细胞共孵育48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达,流式细胞术检测各组细胞CD206和CD14表达,Western blot检测各组细胞ERK和STAT3磷酸化水平.在MKN-45细胞中分别转染lncRNA LOXL1-AS1过表达质粒(lncRNA LOXL1-AS1)和空白质粒(Vector)后提取各组细胞分泌的外泌体(记为lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo),将10μg/mL的lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo分别与M0型巨噬细胞共孵育,检测孵育后各组细胞TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达以及ERK和STAT3磷酸化水平.结果:本文所提取的外泌体符合其结构和生物学特征.相比于PBS组,MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo组细胞TNF-α、CCR7表达显著下调(P<0.01),Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调(P<0.01),CD206+CD14+细胞所占比例显著增加(P<0.001),ERK和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001).相比于Vector exo组,lncRNA LOXL1-AS1 exo组中lncRNA LOXL1-AS1表达显著上调(P<0.001).相比于Vector exo组细胞,lncRNA LOXL1-AS1 exo组巨噬细胞中Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调(P<0.001),CD206+CD14+细胞所占比例显著增加(P<0.001),ERK和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001).结论:胃癌细胞外泌体中lncRNA LOXL1-AS1可显著促进巨噬细胞的M2型极化,其机制可能与激活ERK/STAT3信号通路相关.
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