探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路在调节哺乳期乳腺细胞钠碘转运体(Na+-I- symporter,NIS)表达中的作用,以及不同碘水平对该通路的影响。
方法将原代培养的小鼠哺乳期乳腺细胞分为3组:①对照组[0 μmol/L PI3K抑制剂LY294002+ 0 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factor I,IGF-Ⅰ)];②刺激组(50 μg/L IGF-Ⅰ);③抑制组(40 μmol/L LY294002+ 50 μg/L IGF-Ⅰ)。此外,将原代培养的小鼠哺乳期乳腺细胞按不同碘水平(0、5、50、1 000、3 000 μg/L)处理分为低碘1、2组,适碘组,高碘1、2组,并加入IGF-Ⅰ(50 μg/L)刺激。采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测上述各组细胞中AKT、NIS mRNA及蛋白表达水平。
结果刺激组AKT mRNA表达水平(1.497 ± 0.550)高于抑制组(0.777 ± 0.108,P < 0.05),而刺激组NIS mRNA及蛋白表达水平(0.783 ± 0.187、0.618 ± 0.103)均低于抑制组(2.430 ± 1.423、1.417 ± 0.250,P均< 0.05)。随着碘水平的增加,除高碘1组(1.090 ± 0.356)外,低碘1、2组,适碘组,高碘2组AKT mRNA表达水平(1.758 ± 0.893、1.320 ± 0.538、1.003 ± 0.006、0.745 ± 0.307)为逐渐下降趋势;低碘1、2组,适碘组,高碘1、2组NIS mRNA(2.259 ± 0.682、1.823 ± 0.332、1.409 ± 0.366、1.321 ± 0.405、1.150 ± 0.454)及总AKT蛋白(0.640 ± 0.106、0.601 ± 0.081、0.583 ± 0.089、0.555 ± 0.097、0.532 ± 0.023)表达水平均呈下降趋势;除低碘2组(0.484 ± 0.179)外,NIS蛋白表达水平(0.556 ± 0.199、0.502 ± 0.179、0.455 ± 0.126、0.435 ± 0.138)呈下降趋势;除低碘2组(0.076 ± 0.045)外,p-AKT蛋白表达水平(0.078 ± 0.049、0.079 ± 0.040、0.085 ± 0.055、0.095 ± 0.051)呈上升趋势。
结论PI3K-AKT信号通路在调节哺乳期乳腺细胞NIS表达方面起抑制作用。