探讨膜联蛋白A2 (ANXA2) 在小鼠视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制。

实验研究。将C57BL/6J小鼠分为4组:正常组 (80只) 、氧诱导视网膜病变 (OIR) 空白对照组 (80只) 、OIR阴性干扰组 (50只) 和OIR阳性干扰组 (50只) 。采用视网膜铺片法对比观察氧诱导视网膜新生血管形态学变化。实时荧光 (real-time) PCR法检测正常组和OIR空白对照组12~ 30日龄小鼠视网膜组织中ANXA2 mRNA的表达变化。取4组中17日龄小鼠视网膜行视网膜铺片。应用real-time PCR法及免疫印迹法检测4组17日龄小鼠视网膜组织中ANXA2、血管内皮生长因子 (VEGF) 、基质金属蛋白酶 (MMP) -2、MMP-9和组织金属蛋白酶抑制剂-2 (TIMP-2) 的mRNA和蛋白表达情况。应用单因素方差分析对4组结果进行比较,进一步的两两比较采用SNK-q检验。

4组17日龄小鼠视网膜铺片结果发现,与正常组相比,OIR空白对照组视网膜新生血管迂曲、扩张,分布紊乱,渗漏严重,血管分层不清,大量异常交通支。ANXA2基因干扰后,OIR阳性干扰组视网膜新生血管迂曲现象减轻,血管渗漏较少,微血管瘤及新生血管芽数量减少,视网膜层次较明显,新生血管的危害减轻。不同日龄小鼠视网膜中ANXA2基因表达水平与新生血管生长密切相关,呈现出视网膜血管发育旺盛期高表达,而血管发育停滞期低表达的趋势。real-time PCR法检测结果显示,4组小鼠视网膜中ANXA2、VEGF-α、MMP-2、MMP-9和TIMP-2的mRNA表达水平的差异均有统计学意义 (F=8.122~ 74.009,P值均<0.05) 。进一步两两比较结果显示,OIR空白对照组的VEGF-α (0.22±0.04) 、MMP-2 (11.08±1.28) 、MMP-9 (4.64±0.38) 的基因表达水平较正常组 (0.16±0.02、2.18±1.39、1.17±0.25) 显著上调 (SNK-q检验:P值均<0.01),而OIR阳性干扰组的VEGF-α (0.02±0.01) 、MMP-2 (2.21±0.42) 、MMP-9 (1.33±0.10) 的基因表达水平较OIR空白对照组下调 (SNK-q检验:P值均<0.01) ;OIR空白对照组的TIMP-2基因表达水平 (0.59±0.15) 较正常组 (1.35±0.01) 下调 (SNK-q检验:P<0.05),而OIR阳性干扰组TIMP-2的基因表达水平 (1.19±0.16) 较OIR空白对照组上调 (SNK-q检验:P<0.05) 。免疫印迹法在蛋白水平的检测得到类似结果。

ANXA2在诱导小鼠视网膜新生血管生成时高表达,可调节新生血管相关因子的表达,影响视网膜新生血管的形态学变化。基因干扰技术能成功抑制ANXA2基因的表达,ANXA2有望成为防治视网膜新生血管新的靶点。 (中华眼科杂志,2013,49:642-648)