人GDNF在原代培养的大鼠成纤维细胞中的表达

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目的 研究人脑胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在治疗神经系统疾病中的作用,克隆其前体蛋白cDNA序列,并用于真核细胞表达。 方法 提取我国自建的脑胶质瘤BT325细胞总RNA,用逆转录PCR法扩增GDNF全长cDNA并构建其真核表达载体pCI-neo-GDNF,然后转染原代培养的成纤维细胞,免疫组织化学及原位杂交检测GDNF在细胞中的表达。 结果 从国人脑胶质瘤细胞中扩增到558bp的GDNF全长cDNA,并在GDNF转基因原代成纤维细胞中检测到重组GDNF的转录和表达。 结论 克隆到的GDNF全长cDNA片段,可用于真核细胞表达;其转基因细胞脑内移植后应能治疗包括帕金森病在内的神经系统变性疾病。
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