【摘 要】
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目的建立乳腺癌克隆性T细胞TCRβ链全长编码序列(CDS)的多重PCR扩增方法。方法根据Gen Bank现有TCR序列设计扩增TCRβ链24个亚家族上游引物24条,下游引物2条。对Mg2+、d NTPs
【机 构】
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郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)病理科,郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)中心实验室,
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目的建立乳腺癌克隆性T细胞TCRβ链全长编码序列(CDS)的多重PCR扩增方法。方法根据Gen Bank现有TCR序列设计扩增TCRβ链24个亚家族上游引物24条,下游引物2条。对Mg2+、d NTPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定最佳反应体系进行TCRβ链多重PCR扩增,构建重组质粒并酶切鉴定。结果扩增出乳腺癌转移淋巴结中的TCRβ链全长编码序列并成功构建重组质粒,5例患者共获得24个阳性克隆。结论建立的TCRβ链多重PCR扩增方法具有特异、快速、简便的特点,为研究乳腺癌克隆性T细胞的特点提供了帮助。
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