【摘 要】
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目的 探讨马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤机制及sonic hedgehog(Shh)信号在损伤过程中发挥的作用.方法 以溶剂作为对照组,AA分别以浓度1、10、100 mg/L作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24、48、72 h后,水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞增殖抑制率；Hoechst 33258染色观察胞核形态变化；实时定量PCR检测膜受体patched 1(Ptch1
【机 构】
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325000温州医学院附属第一医院外科实验室,325000温州医学院附属第一医院外科实验室,325000温州医学院附属第一医院外科实验室,325000温州医学院附属第一医院实验诊断中心,325000温
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目的 探讨马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤机制及sonic hedgehog(Shh)信号在损伤过程中发挥的作用.方法 以溶剂作为对照组,AA分别以浓度1、10、100 mg/L作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24、48、72 h后,水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞增殖抑制率；Hoechst 33258染色观察胞核形态变化；实时定量PCR检测膜受体patched 1(Ptch1)、信号开关蛋白smoothened (Smo)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子(TGF)β1和Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA表达；ELISA法检测Shh和TGF-β1含量；Western印迹法检测bcl-2、bax、α-SMA和E-cadherin蛋白表达.结果 WST-1结果显示,AA作用24 h可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并呈浓度依赖性(r=0.817,P=0.047).Hoechst 33258染色发现,1、10 mg/L AA可诱导细胞凋亡,但浓度为100 mg/L时则诱导细胞坏死.10mg/L AA作用细胞24h后,bcl-2蛋白表达下调而bax蛋白表达上调,提示启动细胞凋亡机制可能是通过线粒体途径.Shh蛋白和Smo mRNA表达升高,而Ptch1 mRNA表达下降(P＜0.05),提示Shh信号活化.此外,TGF-β1、α-SMA和ColⅢ表达增加,而E-cadherin表达下降(P＜0.05),提示出现细胞转分化和胶原累积.结论 AA可明显抑制肾小管上皮细胞增殖,诱导其凋亡和坏死.在此过程中,Shh信号被活化,并诱导细胞表型转化进而出现纤维化。
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